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zq20068

铁虫 (初入文坛)

[求助] HPLC 主峰后杂峰有机相浓度低跑不出来,浓度高主峰前面杂峰有重合

最近在摸方法,色谱小白。请教各位大侠:
合成出来的物质杂比较多,当用流动相为甲醇:醋酸铵=70:30,流速为0.8时,主峰前面的杂峰可以跑出来,主峰拖尾,后面貌似有个杂峰跑不出来。调节流动相为甲醇:醋酸铵=75:25,流速0.8时,明显看见主峰后面的有杂峰,但依然没分开,主峰前的杂峰数量减少了,应该是杂峰重合了。这种情况要怎么办啊?想设置梯度洗脱,但也不知道如何设置?
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e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zq20068: 金币+1, 有帮助 2013-08-29 18:00:51
你试试甲醇5%-80% 30min梯度洗脱看看,根据情况在微调梯度优化分离效果
悲催的研发!
2楼2013-08-29 12:43:16
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j115090587

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zq20068: 金币+1, 有帮助 2013-08-29 18:06:18
如果看到你的图谱我们更好帮你分析,笼统的跟你说就是,考虑梯度,考虑用乙腈!
3楼2013-08-29 16:53:46
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zq20068

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by j115090587 at 2013-08-29 16:53:46
如果看到你的图谱我们更好帮你分析,笼统的跟你说就是,考虑梯度,考虑用乙腈!

谱图没弄下来,等明天去实验室搞下来。这个物质很让人无语,只溶于甲醇,我用甲醇溶解之后如果加水,就变得不透明,貌似在水中溶解度不大。用乙腈也不怎么溶,所以当时流动相没敢考虑乙腈。
4楼2013-08-29 18:04:20
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xiaoyaxuan

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以试着换根别的厂家的色谱柱试试,不同厂家色谱柱分离不一样。
5楼2013-08-30 16:06:19
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j115090587

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by zq20068 at 2013-08-29 18:04:20
谱图没弄下来,等明天去实验室搞下来。这个物质很让人无语,只溶于甲醇,我用甲醇溶解之后如果加水,就变得不透明,貌似在水中溶解度不大。用乙腈也不怎么溶,所以当时流动相没敢考虑乙腈。...

不一样也没关系啊,只要不会柱头析出就好啊,而且一般也不会!只能说保持流动相一致比较好,而不是定死了!
6楼2013-09-01 09:41:12
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硅谷假日

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

为什么不用更低比例的甲醇-醋酸铵,是保留时间太长么,色谱里提高分离主要是从流动相,色谱柱两方面着手,换流动相,换柱。梯度暂时不建议使用,通常用于色谱保留相差很大的样品分离使用,样品每次都平衡,不烦躁么。
自装填多种规格高效制备色谱柱,提供小分子难分离样品的纯化服务。
7楼2013-09-04 19:04:13
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zq20068

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 硅谷假日 at 2013-09-04 19:04:13
为什么不用更低比例的甲醇-醋酸铵,是保留时间太长么,色谱里提高分离主要是从流动相,色谱柱两方面着手,换流动相,换柱。梯度暂时不建议使用,通常用于色谱保留相差很大的样品分离使用,样品每次都平衡,不烦躁么 ...

对呀,60%的甲醇保留时间已经16min了
8楼2013-09-05 09:20:43
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zq20068

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by j115090587 at 2013-09-01 09:41:12
不一样也没关系啊,只要不会柱头析出就好啊,而且一般也不会!只能说保持流动相一致比较好,而不是定死了!...

你说的不一样也没关系是什么不一样?还没进行梯度,问题依然存在,好烦啊
9楼2013-09-05 09:22:34
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