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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于T4连接酶 大家交流下
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33ggdf

新虫 (小有名气)

[交流] 关于T4连接酶 大家交流下 已有8人参与

我用的是NEB公司的T4普通连接酶，我的质粒比较大有15k左右，目的片段1k，现在我要连接，我是用热击的方法好呢还是用电转好？如果用电转的话电压应该怎么设置呢？还有就是这个酶连接之后要热失活吗？以前用的不是这个公司的酶，都不用失活，可以直接转化的呀，不知这个到底需不需要？？
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1楼 2013-08-27 15:44:42
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greenygreen

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-28 20:27:34
我一直用NEB的T4呢~觉得比别家都好用。正常连接。控制好插入片段的浓度，高点好！10:1或者更高些。我都是控制在10ul 的连接体系，16度16小时，4度2小时。然后就直接将10ul 的连接产物全部转化DH5a感受态。热击法就行。效率可以，电转据说效率更高！
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9楼2013-08-28 20:19:02
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