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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 纳米生物材料 » 关于EDC/NHS 请教各位大牛
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sunshaokai

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
markar: 金币+1, 应助指数+1, 感谢回帖交流！ 2013-08-20 22:43:45
引用回帖:
10楼: Originally posted by freezymind at 2013-08-19 10:39:32
大神 你好：
  我昨天按你说的方法试了下：25mg连有PEG-COOH纳米粒子溶于5ml水中，加入固体EDC.HCL 8mg，稍候加入8mg NHS, 今天早上仍然没有离心下来沉淀。
  我看虫友们讨论说DCC/NHS在邮箱也是-COOH的催化剂， ...

1.Fe3O4-Au纳米离子和PEG-COOH是怎么作用上去的？你用的是SH-PEG-COOH？总之，你要保证COOH是游离在外面的！
2.你加多巴胺是做什么用呢，因为它的存在，肯定会消耗点一定量的COOH
2.关于离心沉淀的问题，首先你的PEG-COOH纳米粒子离心会沉淀吗？如果它不沉淀，那么你接上蛋白，它基本也不会沉淀；如果你的PEG-COOH纳米粒子离心沉淀，接上蛋白后，由于蛋白能增加其水溶性（就向蛋白本省你通过离心是离不下来的），也有可能不沉淀了。这反而说明蛋白可能接上去了，你就得通过超滤的办法进行提纯了。
3.关于NHS和EDC的用法用量，（1） Nano Lett. 2002, 2, 817–822.
（2）Anal. Chem. 2010, 82, 1427-1433.
关于邮相转水相（1）Adv. Mater. 2011, 23, 4886-4891.
（2） Biomaterials. 2012, 33, 2215-2222.
其实你参照第一个文献做法，直接包PVP就可以。
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freezymind
11楼2013-08-20 16:30:05
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freezymind

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by sunshaokai at 2013-08-20 16:30:05
1.Fe3O4-Au纳米离子和PEG-COOH是怎么作用上去的？你用的是SH-PEG-COOH？总之，你要保证COOH是游离在外面的！
2.你加多巴胺是做什么用呢，因为它的存在，肯定会消耗点一定量的COOH
2.关于离心沉淀的问题，首先你的 ...

我用的是COOH-PEG-COOH (Mr2000) 溶于水是靠多巴胺和Fe纳米粒子结合，再在DCC/NHS的作用下使PEG和多巴胺结合，。会不会有可能PEG两端的羧基都和多巴胺结合了，导致游离的羧基很少了？有什么方法可以防止吗？我看文献上要通氮气，不知道是起什么作用？有没有什么方法可以检测水溶液中的羧基没？

我的PEG-COOH纳米粒子离心不会有沉淀，但加完蛋白之后会有很少的一点沉淀出来，现在我就是觉得连接效率太低了，不管是增加EDC 纳米粒子 还是蛋白都基本上只有一点点沉淀。

关于超滤：我纳米粒子质谱做出来分子量大概是90，000左右，蛋白分子量是18，5000，我用300，000的超滤管可以吗？一个纳米粒子上应该可以连不止一个蛋白吧？

因为后期Au表面还要连接另一个药物，所以如果直接包被的话可能后面实验没法进行~~
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做好实验，好做实验
12楼2013-08-20 22:15:54
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freezymind

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by sunshaokai at 2013-08-20 16:30:05
1.Fe3O4-Au纳米离子和PEG-COOH是怎么作用上去的？你用的是SH-PEG-COOH？总之，你要保证COOH是游离在外面的！
2.你加多巴胺是做什么用呢，因为它的存在，肯定会消耗点一定量的COOH
2.关于离心沉淀的问题，首先你的 ...

大神要是有时间看一下这篇文章的结构图，我基本是照着这个做的
Au–Fe3O4 Dumbbell Nanoparticles as Dual-Functional Probes
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做好实验，好做实验
13楼2013-08-20 22:18:25
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freezymind

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by sunshaokai at 2013-08-20 16:30:05
1.Fe3O4-Au纳米离子和PEG-COOH是怎么作用上去的？你用的是SH-PEG-COOH？总之，你要保证COOH是游离在外面的！
2.你加多巴胺是做什么用呢，因为它的存在，肯定会消耗点一定量的COOH
2.关于离心沉淀的问题，首先你的 ...

化学所用的超滤管和医学院是一样的吗？向我这个实验的话，一般用那种超滤管？用的时候不考虑纳米粒子的大小吗？
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做好实验，好做实验
14楼2013-08-21 17:55:51
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piaofei123

铁虫 (初入文坛)
干嘛这么麻烦，不如直接去买羧基化的磁珠，然后去接你的单抗
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15楼2013-08-24 10:20:51
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piaofei123

铁虫 (初入文坛)
或者说用羧基的磁珠去验证你的单抗的性能
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16楼2013-08-24 10:22:20
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freezymind

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by piaofei123 at 2013-08-24 10:22:20
或者说用羧基的磁珠去验证你的单抗的性能

因为我们后期还要再在纳米粒子（Au)上再接一个药物，所以比较麻烦，本来是合作项目，现在那边不合作了导致我一个医学生在苦逼的摸索，还请各位大神多多帮助哈
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做好实验，好做实验
17楼2013-08-25 13:15:12
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sunshaokai

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by freezymind at 2013-08-20 22:15:54
我用的是COOH-PEG-COOH (Mr2000) 溶于水是靠多巴胺和Fe纳米粒子结合，再在DCC/NHS的作用下使PEG和多巴胺结合，。会不会有可能PEG两端的羧基都和多巴胺结合了，导致游离的羧基很少了？有什么方法可以防止吗？我看文 ...

出门了几天，才回来，才看到。
（1）PEG两个羧基，你就要少加EDC/NHS，使得只能一个羧基活化，这样可以尽量减少副产物的生成。
（2）我不知道你最终这个实验是想要达到什么结果，如果你就是想在磁球表面接上两种蛋白（或者两种药物），你不需要用Au的。你可以直接用COOH的磁球，这个有很多经典的制备方法（粒径从几个纳米到几十个纳米都可以），然后直接在上面接一个，然后再接一个就可以的。
（3）写到这里，我是觉得你这个体系设计不是很好（个人建议）。因为你的蛋白分子量很大，你的磁球分子量很小，其尺寸远小于蛋白。如果你用这么小的磁球去和蛋白作用，当磁球过量，就是变成蛋白表面包覆很多个磁球，蛋白还能去识别它的目标吗？你只能让蛋白过量，你分离就得使用才超滤，或者你说的300，000应该可以。
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18楼2013-08-26 22:23:43
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sunshaokai

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
红舟流星: 金币+3, 应助指数+1, 欢迎来生物材料板块积极应助交流 2013-08-26 23:32:26
引用回帖:
17楼: Originally posted by freezymind at 2013-08-25 13:15:12
因为我们后期还要再在纳米粒子（Au)上再接一个药物，所以比较麻烦，本来是合作项目，现在那边不合作了导致我一个医学生在苦逼的摸索，还请各位大神多多帮助哈...

（1）如果你只是想在磁球表面接上两种蛋白，我建议你使用粒径较大的羧基功能化磁球（很容易制备），如果你对磁球粒径没有限制的话，可以使用粒径较大的羧基功能化磁球（几十nm的），这样直接用磁铁既可以实现分离提纯，非常方便。

（2）至于接两种蛋白，你只要控制好投料比，可以先将一种蛋白接上去，它是不会把所用COOH都反应没的；然后再接第二种药物既可，所有过程都可以用磁铁吸附提纯，非常方便。

（3）顺便回复你问的关于怎么判断有没有羧基的问题。。。你可以做zeta电势测定，如果有很多COOH的话（或者总COOH数-总NH2数），这个值会很负，比如-20...
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19楼2013-08-26 22:31:17
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freezymind

新虫 (初入文坛)
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19楼: Originally posted by sunshaokai at 2013-08-26 22:31:17
（1）如果你只是想在磁球表面接上两种蛋白，我建议你使用粒径较大的羧基功能化磁球（很容易制备），如果你对磁球粒径没有限制的话，可以使用粒径较大的羧基功能化磁球（几十nm的），这样直接用磁铁既可以实现分离提 ...

嗯，好的。我空了去做下zeta电势测定。
第二种药物是没有氨基的，是靠Au-S结合，所以还比较麻烦，不过还是谢谢你，
再次非常感谢
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做好实验，好做实验
20楼2013-08-26 23:26:13
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