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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 纳米生物材料 » 关于EDC/NHS 请教各位大牛
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freezymind

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于EDC/NHS 请教各位大牛

最近在做Fe3O4-Au纳米粒子连赫赛汀（一种单克隆抗体药物）的实验，试了挺多遍都没有理想的结果，各位大牛帮忙看看哪里出问题了：
我的具体步骤：
1、5mg连有PEG-COOH纳米粒子溶于5ml水中，
2、加入固体EDC.HCL 220mg(文献上看来的，50、100mg也都试过）                        
sulfo-NHS 200mg(EDC.HCL/sulfo-NHS 1:1 5:1 10:1也都试过），调节PH至5.0左右，室温卵育15min(30min  1h 2h都试过），
3、硼砂缓冲液调节至7.0（亦曾试过用超滤管去除EDC NHS后调节PH）加入赫赛汀室温2h（室温过夜、4°2h过夜都试过）。

离心后没什么沉淀出来啊，文献上说会有沉淀出现的。请大牛们帮我看看哪里出问题了，感激不尽
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做好实验，好做实验
1楼2013-08-17 00:04:45
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sunshaokai

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
markar: 金币+1, 应助指数+1, 感谢回帖交流！ 2013-08-20 22:43:45
引用回帖:
10楼: Originally posted by freezymind at 2013-08-19 10:39:32
大神 你好：
  我昨天按你说的方法试了下：25mg连有PEG-COOH纳米粒子溶于5ml水中，加入固体EDC.HCL 8mg，稍候加入8mg NHS, 今天早上仍然没有离心下来沉淀。
  我看虫友们讨论说DCC/NHS在邮箱也是-COOH的催化剂， ...

1.Fe3O4-Au纳米离子和PEG-COOH是怎么作用上去的？你用的是SH-PEG-COOH？总之，你要保证COOH是游离在外面的！
2.你加多巴胺是做什么用呢，因为它的存在，肯定会消耗点一定量的COOH
2.关于离心沉淀的问题，首先你的PEG-COOH纳米粒子离心会沉淀吗？如果它不沉淀，那么你接上蛋白，它基本也不会沉淀；如果你的PEG-COOH纳米粒子离心沉淀，接上蛋白后，由于蛋白能增加其水溶性（就向蛋白本省你通过离心是离不下来的），也有可能不沉淀了。这反而说明蛋白可能接上去了，你就得通过超滤的办法进行提纯了。
3.关于NHS和EDC的用法用量，（1） Nano Lett. 2002, 2, 817–822.
（2）Anal. Chem. 2010, 82, 1427-1433.
关于邮相转水相（1）Adv. Mater. 2011, 23, 4886-4891.
（2） Biomaterials. 2012, 33, 2215-2222.
其实你参照第一个文献做法，直接包PVP就可以。
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freezymind
11楼2013-08-20 16:30:05
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xingjiuwcc

木虫 (著名写手)

新手上路
顶顶

[ 发自小木虫客户端 ]
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一朝踏上读研路，从此妹子是路人
2楼2013-08-17 00:08:04
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zyy880326

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
freezymind: 金币+1, ★有帮助, 金币较少，多多见谅哈 2013-08-17 12:14:34
freezymind: 金币+4, ★★★很有帮助, 感谢达人 2013-08-17 21:22:47
红舟流星: 金币+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-08-17 22:33:10
你看下这个贴：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我觉得你的步骤有问题，一般不这样做吧。还有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高，是不是该NHS的量多投些吧。我最近也在调研文献，也要做这种反应，希望多交流下吧。
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Tostrive,toseek,tofindandnottoyield.
3楼2013-08-17 09:36:42
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freezymind

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zyy880326 at 2013-08-17 09:36:42
你看下这个贴：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我觉得你的步骤有问题，一般不这样做吧。还有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高，是不是该NHS的量多投些吧。我最近也在调研文献，也要做这种反应 ...

我看文献上基本上都是说EDC要过量的吧，下次可以试试NHS过量。还有我的步骤和链接上的没差别吧，我感觉我要陷入死胡同了。你觉得不妥的地方直接说出来嘛，
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做好实验，好做实验
4楼2013-08-17 12:27:19
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