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freezymind新虫 (初入文坛)
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[求助]
关于EDC/NHS 请教各位大牛
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最近在做Fe3O4-Au纳米粒子连赫赛汀（一种单克隆抗体药物）的实验，试了挺多遍都没有理想的结果，各位大牛帮忙看看哪里出问题了： 我的具体步骤： 1、5mg连有PEG-COOH纳米粒子溶于5ml水中， 2、加入固体EDC.HCL 220mg(文献上看来的，50、100mg也都试过） sulfo-NHS 200mg(EDC.HCL/sulfo-NHS 1:1 5:1 10:1也都试过），调节PH至5.0左右，室温卵育15min(30min 1h 2h都试过）， 3、硼砂缓冲液调节至7.0（亦曾试过用超滤管去除EDC NHS后调节PH）加入赫赛汀室温2h（室温过夜、4°2h过夜都试过）。 离心后没什么沉淀出来啊，文献上说会有沉淀出现的。请大牛们帮我看看哪里出问题了，感激不尽 |
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sunshaokai
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【答案】应助回帖
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markar: 金币+1, 应助指数+1, 感谢回帖交流！ 2013-08-20 22:43:45
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1.Fe3O4-Au纳米离子和PEG-COOH是怎么作用上去的？你用的是SH-PEG-COOH？总之，你要保证COOH是游离在外面的！ 2.你加多巴胺是做什么用呢，因为它的存在，肯定会消耗点一定量的COOH 2.关于离心沉淀的问题，首先你的PEG-COOH纳米粒子离心会沉淀吗？如果它不沉淀，那么你接上蛋白，它基本也不会沉淀；如果你的PEG-COOH纳米粒子离心沉淀，接上蛋白后，由于蛋白能增加其水溶性（就向蛋白本省你通过离心是离不下来的），也有可能不沉淀了。这反而说明蛋白可能接上去了，你就得通过超滤的办法进行提纯了。 3.关于NHS和EDC的用法用量，（1） Nano Lett. 2002, 2, 817–822. （2）Anal. Chem. 2010, 82, 1427-1433. 关于邮相转水相（1）Adv. Mater. 2011, 23, 4886-4891. （2） Biomaterials. 2012, 33, 2215-2222. 其实你参照第一个文献做法，直接包PVP就可以。 |
freezymind11楼2013-08-20 16:30:05
xingjiuwcc
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2楼2013-08-17 00:08:04
【答案】应助回帖
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| 你看下这个贴：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我觉得你的步骤有问题，一般不这样做吧。还有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高，是不是该NHS的量多投些吧。我最近也在调研文献，也要做这种反应，希望多交流下吧。 |
3楼2013-08-17 09:36:42
freezymind
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4楼2013-08-17 12:27:19
