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freezymind新虫 (初入文坛)
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[求助]
关于EDC/NHS 请教各位大牛
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最近在做Fe3O4-Au纳米粒子连赫赛汀（一种单克隆抗体药物）的实验，试了挺多遍都没有理想的结果，各位大牛帮忙看看哪里出问题了： 我的具体步骤： 1、5mg连有PEG-COOH纳米粒子溶于5ml水中， 2、加入固体EDC.HCL 220mg(文献上看来的，50、100mg也都试过） sulfo-NHS 200mg(EDC.HCL/sulfo-NHS 1:1 5:1 10:1也都试过），调节PH至5.0左右，室温卵育15min(30min 1h 2h都试过）， 3、硼砂缓冲液调节至7.0（亦曾试过用超滤管去除EDC NHS后调节PH）加入赫赛汀室温2h（室温过夜、4°2h过夜都试过）。 离心后没什么沉淀出来啊，文献上说会有沉淀出现的。请大牛们帮我看看哪里出问题了，感激不尽 |
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freezymind
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我用的是COOH-PEG-COOH (Mr2000) 溶于水是靠多巴胺和Fe纳米粒子结合，再在DCC/NHS的作用下使PEG和多巴胺结合，。会不会有可能PEG两端的羧基都和多巴胺结合了，导致游离的羧基很少了？有什么方法可以防止吗？我看文献上要通氮气，不知道是起什么作用？有没有什么方法可以检测水溶液中的羧基没？ 我的PEG-COOH纳米粒子离心不会有沉淀，但加完蛋白之后会有很少的一点沉淀出来，现在我就是觉得连接效率太低了，不管是增加EDC 纳米粒子 还是蛋白都基本上只有一点点沉淀。 关于超滤：我纳米粒子质谱做出来分子量大概是90，000左右，蛋白分子量是18，5000，我用300，000的超滤管可以吗？一个纳米粒子上应该可以连不止一个蛋白吧？ 因为后期Au表面还要连接另一个药物，所以如果直接包被的话可能后面实验没法进行~~ |
12楼2013-08-20 22:15:54
xingjiuwcc
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2楼2013-08-17 00:08:04
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| 你看下这个贴：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我觉得你的步骤有问题，一般不这样做吧。还有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高，是不是该NHS的量多投些吧。我最近也在调研文献，也要做这种反应，希望多交流下吧。 |
3楼2013-08-17 09:36:42
freezymind
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