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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 纳米生物材料 » 关于EDC/NHS 请教各位大牛
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freezymind

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于EDC/NHS 请教各位大牛

最近在做Fe3O4-Au纳米粒子连赫赛汀（一种单克隆抗体药物）的实验，试了挺多遍都没有理想的结果，各位大牛帮忙看看哪里出问题了：
我的具体步骤：
1、5mg连有PEG-COOH纳米粒子溶于5ml水中，
2、加入固体EDC.HCL 220mg(文献上看来的，50、100mg也都试过）                        
sulfo-NHS 200mg(EDC.HCL/sulfo-NHS 1:1 5:1 10:1也都试过），调节PH至5.0左右，室温卵育15min(30min  1h 2h都试过），
3、硼砂缓冲液调节至7.0（亦曾试过用超滤管去除EDC NHS后调节PH）加入赫赛汀室温2h（室温过夜、4°2h过夜都试过）。

离心后没什么沉淀出来啊，文献上说会有沉淀出现的。请大牛们帮我看看哪里出问题了，感激不尽
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做好实验，好做实验
1楼2013-08-17 00:04:45
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freezymind

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by sunshaokai at 2013-08-20 16:30:05
1.Fe3O4-Au纳米离子和PEG-COOH是怎么作用上去的？你用的是SH-PEG-COOH？总之，你要保证COOH是游离在外面的！
2.你加多巴胺是做什么用呢，因为它的存在，肯定会消耗点一定量的COOH
2.关于离心沉淀的问题，首先你的 ...

我用的是COOH-PEG-COOH (Mr2000) 溶于水是靠多巴胺和Fe纳米粒子结合，再在DCC/NHS的作用下使PEG和多巴胺结合，。会不会有可能PEG两端的羧基都和多巴胺结合了，导致游离的羧基很少了？有什么方法可以防止吗？我看文献上要通氮气，不知道是起什么作用？有没有什么方法可以检测水溶液中的羧基没？

我的PEG-COOH纳米粒子离心不会有沉淀，但加完蛋白之后会有很少的一点沉淀出来，现在我就是觉得连接效率太低了，不管是增加EDC 纳米粒子 还是蛋白都基本上只有一点点沉淀。

关于超滤：我纳米粒子质谱做出来分子量大概是90，000左右，蛋白分子量是18，5000，我用300，000的超滤管可以吗？一个纳米粒子上应该可以连不止一个蛋白吧？

因为后期Au表面还要连接另一个药物，所以如果直接包被的话可能后面实验没法进行~~
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做好实验，好做实验
12楼2013-08-20 22:15:54
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xingjiuwcc

木虫 (著名写手)

新手上路
顶顶

[ 发自小木虫客户端 ]
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一朝踏上读研路，从此妹子是路人
2楼2013-08-17 00:08:04
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zyy880326

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
freezymind: 金币+1, ★有帮助, 金币较少，多多见谅哈 2013-08-17 12:14:34
freezymind: 金币+4, ★★★很有帮助, 感谢达人 2013-08-17 21:22:47
红舟流星: 金币+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-08-17 22:33:10
你看下这个贴：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我觉得你的步骤有问题，一般不这样做吧。还有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高，是不是该NHS的量多投些吧。我最近也在调研文献，也要做这种反应，希望多交流下吧。
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Tostrive,toseek,tofindandnottoyield.
3楼2013-08-17 09:36:42
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freezymind

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zyy880326 at 2013-08-17 09:36:42
你看下这个贴：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我觉得你的步骤有问题，一般不这样做吧。还有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高，是不是该NHS的量多投些吧。我最近也在调研文献，也要做这种反应 ...

我看文献上基本上都是说EDC要过量的吧，下次可以试试NHS过量。还有我的步骤和链接上的没差别吧，我感觉我要陷入死胡同了。你觉得不妥的地方直接说出来嘛，
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做好实验，好做实验
4楼2013-08-17 12:27:19
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