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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 纳米生物材料 » 关于EDC/NHS 请教各位大牛
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freezymind

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于EDC/NHS 请教各位大牛

最近在做Fe3O4-Au纳米粒子连赫赛汀（一种单克隆抗体药物）的实验，试了挺多遍都没有理想的结果，各位大牛帮忙看看哪里出问题了：
我的具体步骤：
1、5mg连有PEG-COOH纳米粒子溶于5ml水中，
2、加入固体EDC.HCL 220mg(文献上看来的，50、100mg也都试过）                        
sulfo-NHS 200mg(EDC.HCL/sulfo-NHS 1:1 5:1 10:1也都试过），调节PH至5.0左右，室温卵育15min(30min  1h 2h都试过），
3、硼砂缓冲液调节至7.0（亦曾试过用超滤管去除EDC NHS后调节PH）加入赫赛汀室温2h（室温过夜、4°2h过夜都试过）。

离心后没什么沉淀出来啊，文献上说会有沉淀出现的。请大牛们帮我看看哪里出问题了，感激不尽
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做好实验，好做实验
1楼2013-08-17 00:04:45
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sunshaokai

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by freezymind at 2013-08-20 22:15:54
我用的是COOH-PEG-COOH (Mr2000) 溶于水是靠多巴胺和Fe纳米粒子结合，再在DCC/NHS的作用下使PEG和多巴胺结合，。会不会有可能PEG两端的羧基都和多巴胺结合了，导致游离的羧基很少了？有什么方法可以防止吗？我看文 ...

出门了几天，才回来，才看到。
（1）PEG两个羧基，你就要少加EDC/NHS，使得只能一个羧基活化，这样可以尽量减少副产物的生成。
（2）我不知道你最终这个实验是想要达到什么结果，如果你就是想在磁球表面接上两种蛋白（或者两种药物），你不需要用Au的。你可以直接用COOH的磁球，这个有很多经典的制备方法（粒径从几个纳米到几十个纳米都可以），然后直接在上面接一个，然后再接一个就可以的。
（3）写到这里，我是觉得你这个体系设计不是很好（个人建议）。因为你的蛋白分子量很大，你的磁球分子量很小，其尺寸远小于蛋白。如果你用这么小的磁球去和蛋白作用，当磁球过量，就是变成蛋白表面包覆很多个磁球，蛋白还能去识别它的目标吗？你只能让蛋白过量，你分离就得使用才超滤，或者你说的300，000应该可以。
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18楼2013-08-26 22:23:43
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xingjiuwcc

木虫 (著名写手)

新手上路
顶顶

[ 发自小木虫客户端 ]
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一朝踏上读研路，从此妹子是路人
2楼2013-08-17 00:08:04
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zyy880326

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
freezymind: 金币+1, ★有帮助, 金币较少，多多见谅哈 2013-08-17 12:14:34
freezymind: 金币+4, ★★★很有帮助, 感谢达人 2013-08-17 21:22:47
红舟流星: 金币+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-08-17 22:33:10
你看下这个贴：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我觉得你的步骤有问题，一般不这样做吧。还有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高，是不是该NHS的量多投些吧。我最近也在调研文献，也要做这种反应，希望多交流下吧。
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Tostrive,toseek,tofindandnottoyield.
3楼2013-08-17 09:36:42
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freezymind

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zyy880326 at 2013-08-17 09:36:42
你看下这个贴：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我觉得你的步骤有问题，一般不这样做吧。还有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高，是不是该NHS的量多投些吧。我最近也在调研文献，也要做这种反应 ...

我看文献上基本上都是说EDC要过量的吧，下次可以试试NHS过量。还有我的步骤和链接上的没差别吧，我感觉我要陷入死胡同了。你觉得不妥的地方直接说出来嘛，
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做好实验，好做实验
4楼2013-08-17 12:27:19
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