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xianlu

铜虫 (小有名气)

[求助] 上ODS开放柱如何操作

历经3次硅胶柱上下来的一个馏分(合并了23管),量很多,极性较大(有一定的极性跨度),因硅胶板显示正相再分离的话效果不理想,所以想上反相柱再分分,用的是自己装的ODS开放柱,这里想请教:
1、上样时直接将样品混悬着上到柱体上面吗?这样的话我有2点担心:
     (1)样品中混有的洗脱不下来的成分(即不溶性成分,怎么洗脱也洗脱不下来,甚至是灰尘)最终会污染柱子。
     (2)样品有一定粘性,会堵塞柱子。
2、上样时将样品用甲醇溶解后再上样吗?这样的话我有点担心:
     (1)样品难以用少量溶剂溶解(无论加热、超声等处理),所以样液体积很大,极不利于分离。
      因为样品的成分极性还有一定跨度,ODS薄层板显示有7-9个点,且样品总量较多,我只是想通过此次ODS柱分离,将样品进一步砍段,有幸的话能拿到一两个单体最好。但操作起来实在是让我为难,真正请教各位,尤其是亲自做过ODS开放柱的高手们能指点一二,内心无比感激!
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xianlu

铜虫 (小有名气)

首先要感谢各位的积极帮助与指点,我的重点问题就是:我怎么上样?混悬着(样品未完全溶解)上样?还是溶解后上样?(备注:样品不好溶)
6楼2013-08-17 15:16:54
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wangwang1989

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xianlu: 金币+5, 有帮助, thank you 2013-08-17 15:12:47
xiaoxiao270: 金币+1 2013-08-17 18:42:32
怕堵,用微孔滤膜过滤了以后再上。样品肯定是越浓越好。开放ods目的还是砍断,分离效果不好是肯定的。不怕麻烦就把馏分接的细一点。甲醇不好溶解加点水试试,或者试别的能上ods的溶剂。
我有一个梦想,我想当校长
2楼2013-08-15 16:53:12
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JINQH1982

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xianlu: 金币+5, 有帮助, thank you 2013-08-17 15:13:11
xiaoxiao270: 金币+1 2013-08-17 18:42:36
先点RP-TLC看看 100% MeOH,或者MeCN 条件下原点有无残留,有很多残留,就得点4的膜过一下,再点板看看。如果残留还是很多就不合适用反相了,如果没有其它好的方法,你们实验室有钱的话也是可以上反相的,过完柱子以后把柱子上层部分扔掉,下面的可以接着用。
3楼2013-08-16 09:51:30
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cmu020812

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xianlu: 金币+5, thank you 2013-08-17 15:15:01
xiaoxiao270: 金币+1 2013-08-17 18:42:40
样品量大建议先用凝胶截下段。上ODS最好用洗脱溶剂溶样,如果溶解性还是不好,因极性较大可以尝试加水。上样前最好滤膜过滤或者棉花粗滤一下也可。上样前建议先用反相板摸索好洗脱条件。
4楼2013-08-16 10:05:57
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