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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 上ODS开放柱如何操作
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xianlu

铜虫 (小有名气)

[求助] 上ODS开放柱如何操作

历经3次硅胶柱上下来的一个馏分（合并了23管），量很多，极性较大（有一定的极性跨度），因硅胶板显示正相再分离的话效果不理想，所以想上反相柱再分分，用的是自己装的ODS开放柱，这里想请教：
1、上样时直接将样品混悬着上到柱体上面吗？这样的话我有2点担心：
     （1）样品中混有的洗脱不下来的成分（即不溶性成分，怎么洗脱也洗脱不下来，甚至是灰尘）最终会污染柱子。
     （2）样品有一定粘性，会堵塞柱子。
2、上样时将样品用甲醇溶解后再上样吗？这样的话我有点担心：
     （1）样品难以用少量溶剂溶解（无论加热、超声等处理），所以样液体积很大，极不利于分离。
      因为样品的成分极性还有一定跨度，ODS薄层板显示有7-9个点，且样品总量较多，我只是想通过此次ODS柱分离，将样品进一步砍段，有幸的话能拿到一两个单体最好。但操作起来实在是让我为难，真正请教各位，尤其是亲自做过ODS开放柱的高手们能指点一二，内心无比感激！
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1楼 2013-08-15 16:40:01
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cmu020812

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xianlu at 2013-08-17 15:14:19
请问，怎么用凝胶柱截段，样品量这么大，也不好溶，怎么上样？...

跟上反相柱的方法是一样的，可以用甲醇水溶解样品，然后一般用甲醇洗脱。我一般用Sephadex LH20
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10楼2013-08-18 21:55:32
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wangwang1989

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xianlu: 金币+5, ★有帮助, thank you 2013-08-17 15:12:47
xiaoxiao270: 金币+1 2013-08-17 18:42:32
怕堵，用微孔滤膜过滤了以后再上。样品肯定是越浓越好。开放ods目的还是砍断，分离效果不好是肯定的。不怕麻烦就把馏分接的细一点。甲醇不好溶解加点水试试，或者试别的能上ods的溶剂。
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我有一个梦想，我想当校长
2楼2013-08-15 16:53:12
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JINQH1982

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xianlu: 金币+5, ★有帮助, thank you 2013-08-17 15:13:11
xiaoxiao270: 金币+1 2013-08-17 18:42:36
先点RP-TLC看看 100% MeOH,或者MeCN 条件下原点有无残留，有很多残留，就得点4的膜过一下，再点板看看。如果残留还是很多就不合适用反相了，如果没有其它好的方法，你们实验室有钱的话也是可以上反相的，过完柱子以后把柱子上层部分扔掉，下面的可以接着用。
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3楼2013-08-16 09:51:30
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cmu020812

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xianlu: 金币+5, thank you 2013-08-17 15:15:01
xiaoxiao270: 金币+1 2013-08-17 18:42:40
样品量大建议先用凝胶截下段。上ODS最好用洗脱溶剂溶样，如果溶解性还是不好，因极性较大可以尝试加水。上样前最好滤膜过滤或者棉花粗滤一下也可。上样前建议先用反相板摸索好洗脱条件。
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4楼2013-08-16 10:05:57
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