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luba

新虫 (小有名气)

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[求助] 通过紫外吸收光谱确定金属是否与蛋白结合----很多疑问，跪求大神解答！

文献上类似的实验做出来的图上吸收峰在265nm，说是一价铜的硫醇盐特有的吸收峰，我的金属和他不同，做出来有好多峰，同时做了空白buffer以及仅是蛋白、仅是金属的对照，所有的样品的趋势几乎完全相同，也就是说没发现有十分明显的特异的峰。现在的问题是：
1.文献用的是hepes buffer ,我用的是tris-hcl,因为我觉得hepes里有很多金属，会干扰实验。那么我到底该用哪个？tris-hcl做紫外吸收光谱的溶剂可行吗？
2.我将蛋白溶液和金属溶液加进孔板里后，在读数之前是否需要孵育或者振荡他们才能很好的结合？
3.从我目前的实验结果来看，似乎253nm处有一个峰，请问二价铜若是和半胱氨酸结合，产生的吸收峰是多大？253有可能是什么特定结构的峰？
第一次做，完全没有概念，做出来的数据又摸不着头脑，蛋白是合成的，很贵很少，又不敢轻举妄动。。哪位大神熟悉这块儿的帮忙解答下吧！谢谢了！

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