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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » HEK-293细胞又被污染了，捉急啊，恳请求各路大侠们帮忙分析一下！
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阿飞1990乖乖

荣誉版主 (职业作家)

优秀版主

[求助] HEK-293细胞又被污染了，捉急啊，恳请求各路大侠们帮忙分析一下！

我养的细胞是HEK-293细胞，人胚肾细胞。最近细胞总是出现污染的状况。
我分析了下：
1、第一次出现这种状况后，培养箱已消毒，而且培养箱里其他人的细胞都没问题，培养箱应该没问题了；

2、做了空白对照试验，把只放完全培养液的培养皿放培养箱里5天了，也没出现染菌的问题，所以培养液、血清应该没问题，同时证明培养箱没问题；

3、每次细胞复苏后，前两天细胞状态都很好，但是从第三天开始，就出现一些漂浮的白色小点，并且会长的越来越大，显微镜下观察，为絮状的团块。但是细胞没受影响，看起来状态还不错。

Question：我查了相关资料，怀疑是霉菌污染，是不是之前冻存的细胞出问题了，被真菌孢子污染了？请各位高手帮忙分析下，该怎么解决？
HEK-293细胞又被污染了，捉急啊，恳请求各路大侠们帮忙分析一下！
培养皿里出现的白色漂浮物.JPG


HEK-293细胞又被污染了，捉急啊，恳请求各路大侠们帮忙分析一下！-1
显微镜下的絮状物.JPG


HEK-293细胞又被污染了，捉急啊，恳请求各路大侠们帮忙分析一下！-2
03.png


HEK-293细胞又被污染了，捉急啊，恳请求各路大侠们帮忙分析一下！-3
293.png



[ 来自小组 食品科学 ]
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物来顺应，未来不迎，当时不杂，既过不恋。
1楼 2013-08-15 10:25:41
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

阿飞1990乖乖

荣誉版主 (职业作家)

优秀版主
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 萌梦-kitty at 2013-08-15 15:36:42
虽然帮不上忙，但是希望能早点解决问题，各路大仙快点现身吧

不是应助帖，想发金币也不行啊！送一朵花吧
赞一下(1人) 回复此楼
物来顺应，未来不迎，当时不杂，既过不恋。
6楼2013-08-15 18:59:12
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普通回帖

liying2718

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
阿飞1990乖乖: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-08-15 10:55:19
1.首先建议你换种血清试试，这种情况血清污染较多见
2.排除你个人操作原因，不知道你平时操作习惯如何，没法判断
3.细胞冻存出了问题，那就重新找细胞株。
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2楼2013-08-15 10:40:47
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阿飞1990乖乖

荣誉版主 (职业作家)

优秀版主
引用回帖:
2楼: Originally posted by liying2718 at 2013-08-15 10:40:47
1.首先建议你换种血清试试，这种情况血清污染较多见
2.排除你个人操作原因，不知道你平时操作习惯如何，没法判断
3.细胞冻存出了问题，那就重新找细胞株。

1、血清用的是2700块钱一瓶的澳洲胎牛血清。
下次做之前把血清用0.22um滤膜滤一下。
2、操作应该没问题，之前做了半年也没出现这个问题。以后会更小心的。
谢谢您的建议！
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物来顺应，未来不迎，当时不杂，既过不恋。
3楼2013-08-15 10:59:49
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conanzzz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
阿飞1990乖乖: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-08-15 18:58:10
很麻烦，像真菌......
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4楼2013-08-15 11:08:45
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萌梦-kitty

铜虫 (小有名气)
虽然帮不上忙，但是希望能早点解决问题，各路大仙快点现身吧
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

阿飞1990乖乖
Nopains,nogains
5楼2013-08-15 15:36:42
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
阿飞1990乖乖: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢您的建议，只能用新的细胞了。 2013-08-16 10:03:03
阿飞1990乖乖: 金币+8, ★★★★★最佳答案 2013-10-12 09:45:34
明显是真菌，多来自冻存或复苏的过程，霉菌容易交叉污染，不像细菌能用十倍抗生素解决，建议污染的细胞都处理掉，然后控制复苏过程，冻存管口在复苏的时候不要碰到水，水浴锅和培养箱的水最好也经常换，水里容易滋生霉菌。
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ForDream！
7楼2013-08-16 08:41:59
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yakir

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
阿飞1990乖乖: 金币+5, ★★★很有帮助, 但是这种东西会越长越大，越来越多，应该不是血清结晶物吧？ 2013-08-16 10:06:13
看上去确实挺像真菌的，这样就需要重新去找冻存的细胞。
但是如果是真菌的话菌丝不是很明显，所以也有可能是血清结晶物，你也可以换新的血清尝试一下。
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一步一步！
8楼2013-08-16 09:30:38
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yakir

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
阿飞1990乖乖: 金币+5, ★★★很有帮助, 恩，谢谢提醒！ 2013-08-16 10:48:55
找新的293用原先的培养基试试，如果还是相同的现象的话，就应该是血清的问题。
血清结晶物会慢慢析出的，也会变大变多。。
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一步一步！
9楼2013-08-16 10:44:58
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hhyuy

铜虫 (初入文坛)
你做了完全培养基的对照试验没问题的话基本就是细胞冻存或者复苏的时候出问题了！找个另外一批冻存的细胞复苏看看，
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10楼2013-08-16 16:31:53
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