应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：载体用Nhe1和Sma1双酶切，片段用Nhe1单酶切，两者能连上吗？
71/1返回列表
查看: 2363  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zsykk123

金虫 (正式写手)

[求助] 求助：载体用Nhe1和Sma1双酶切，片段用Nhe1单酶切，两者能连上吗？

如题：我实验用的载体用Nhe1和Sma1双酶切，设计引物上游引物含有Nhe1酶切位点，下游引物含有Hind酶切位点，用该引物PCR扩增得到的片段，用Nhe1单酶切，最后将载体与片段进行连接，请问能连上吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
ｍｙ
1楼 2013-08-15 10:02:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wallflowere

新虫 (正式写手)
连不上！
你在载体上选择的酶切位点和引物设计的酶切位点要一致
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-15 10:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsykk123

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wallflowere at 2013-08-15 10:12:39
连不上！
你在载体上选择的酶切位点和引物设计的酶切位点要一致

载体中Sma1酶切后是平端的，片段最后只用Nhe1切
赞一下 回复此楼
ｍｙ
3楼2013-08-15 10:57:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zsykk123: 金币+8, ★有帮助 2013-08-15 13:39:40
gyesang: 金币+2, 正解！ 2013-08-15 16:34:27
gyesang: 回帖置顶 2013-08-15 16:34:31
一端粘性末端，一端是平末端，能连上的，前提是PCR不能用Taq酶，必须用高保真的Pfu等，否则3'端多了个A，不是平末端。
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-15 13:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsykk123

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-15 13:29:22
一端粘性末端，一端是平末端，能连上的，前提是PCR不能用Taq酶，必须用高保真的Pfu等，否则3'端多了个A，不是平末端。

谢谢，是的我就想再次确认这样是否能连上。不过它比普通的两黏端连接要难些对吧，请问你做这样的连接有什么好的办法或注意事项吗？
赞一下 回复此楼
ｍｙ
5楼2013-08-15 13:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-15 16:34:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by zsykk123 at 2013-08-15 13:39:16
谢谢，是的我就想再次确认这样是否能连上。不过它比普通的两黏端连接要难些对吧，请问你做这样的连接有什么好的办法或注意事项吗？...

确实要难点，基因和载体的浓度尽量高点，另外加点聚乙二醇有助于连接。
赞一下 回复此楼
6楼2013-08-15 15:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

跳舞的骆驼

金虫 (初入文坛)
如果感受态的效率高些会增大几率
赞一下 回复此楼
7楼2013-08-15 16:32:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zsykk123 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 6/300 2026-11-01 12:53 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 3/150 2026-11-01 12:53 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 9/450 2026-11-01 12:32 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-01 12:24 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 15/750 2026-11-01 12:11 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 18/900 2026-11-01 12:11 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:14 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 4/200 2026-11-01 11:01 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 9/450 2026-11-01 10:56 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-01 10:43 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 26/1300 2026-11-01 10:22 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 21/1050 2026-11-01 06:46 by YXM1FDCSE8Bn
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 05:22 by YXM1FDCSE8Bn
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 12/600 2026-11-01 02:19 by YXM1FDCSE8Bn
[文学芳草园] 闲聊 +3 myrtle 2026-10-25 6/300 2026-10-29 15:28 by myrtle
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭