24小时热门版块排行榜    

查看: 2282  |  回复: 6

zsykk123

金虫 (正式写手)

[求助] 求助:载体用Nhe1和Sma1双酶切,片段用Nhe1单酶切,两者能连上吗?

如题:我实验用的载体用Nhe1和Sma1双酶切,设计引物上游引物含有Nhe1酶切位点,下游引物含有Hind酶切位点,用该引物PCR扩增得到的片段,用Nhe1单酶切,最后将载体与片段进行连接,请问能连上吗?
回复此楼
my
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wallflowere

新虫 (正式写手)

连不上!
你在载体上选择的酶切位点和引物设计的酶切位点要一致
2楼2013-08-15 10:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsykk123

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wallflowere at 2013-08-15 10:12:39
连不上!
你在载体上选择的酶切位点和引物设计的酶切位点要一致

载体中Sma1酶切后是平端的,片段最后只用Nhe1切
my
3楼2013-08-15 10:57:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zsykk123: 金币+8, 有帮助 2013-08-15 13:39:40
gyesang: 金币+2, 正解! 2013-08-15 16:34:27
gyesang: 回帖置顶 2013-08-15 16:34:31
一端粘性末端,一端是平末端,能连上的,前提是PCR不能用Taq酶,必须用高保真的Pfu等,否则3'端多了个A,不是平末端。
4楼2013-08-15 13:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsykk123

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-15 13:29:22
一端粘性末端,一端是平末端,能连上的,前提是PCR不能用Taq酶,必须用高保真的Pfu等,否则3'端多了个A,不是平末端。

谢谢,是的我就想再次确认这样是否能连上。不过它比普通的两黏端连接要难些对吧,请问你做这样的连接有什么好的办法或注意事项吗?
my
5楼2013-08-15 13:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-15 16:34:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by zsykk123 at 2013-08-15 13:39:16
谢谢,是的我就想再次确认这样是否能连上。不过它比普通的两黏端连接要难些对吧,请问你做这样的连接有什么好的办法或注意事项吗?...

确实要难点,基因和载体的浓度尽量高点,另外加点聚乙二醇有助于连接。
6楼2013-08-15 15:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

跳舞的骆驼

金虫 (初入文坛)

如果感受态的效率高些会增大几率
7楼2013-08-15 16:32:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zsykk123 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 基金不中,共勉 +5 eulota 2026-08-26 5/250 2026-08-26 23:33 by young90
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
请填处理意见