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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有没有做过transwell的前辈？指点一下
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)

[求助] 有没有做过transwell的前辈？指点一下

最近在做cell migration的实验，用的是密理博的transwell，8μm的，24孔板适用的那种独立包装的小室，因为以前没做过，所以先做了预实验，但是做了两次预实验都发现最后用结晶紫染色后什么都没有了，是什么状况呢？实验后处理流程大概是这样的：培养结束后，取出小室，用棉签擦掉小室内的膜上未穿过去的细胞，然后把小室悬挂于24孔板的well里，well里预先加入了0.6mL的4%多聚甲醛，室温固定10min，然后用PBS稍微清洗残留的多聚甲醛，包括在小室里的，然后悬挂浸泡在1%的结晶紫（ddH2O配制），20min，室温，然后用PBS洗去浮色。然后悬挂在24孔板里镜检。基本没看到细胞，但是因为在本来小室放置的对应的那个well里找到了少量的细胞，很少，个位数，说明是有穿过去的，但是为啥就是染不出来？难道在处理的时候掉了？哪位虫友帮忙解答一下？谢谢！
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1楼2013-08-13 16:32:58
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
小室里加细胞的量和培养时间   都很重要
我第一次也没多少   第二次就比较多

milipore的试剂盒里带结晶紫染料  不用自己配啊
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26楼2013-08-29 19:56:51
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
30楼: Originally posted by 小雨莎莎 at 2013-09-06 15:19:55
不知道结晶紫染料的配方是什么？为嘛我重新用甲醇陪的就染不了了呢~而且很奇怪的是，在膜中间位置的染色就很淡，能看到肯定是细胞，但是染得很淡，在周围一圈染色的很好~无解啊~...

配方不知道   试剂盒提供的
中间可能细胞没穿过膜吧   所以没染上    我做的也好像四周细胞多
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31楼2013-09-06 23:17:13
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
32楼: Originally posted by 小雨莎莎 at 2013-09-07 17:58:49
不可能的啊，因为之前做过做出来了，就是重复一下而已哦~...

感觉那个实验做一次也就成了   成本太高   

没准在做一次就出来啦        实验经常有奇怪的事发生
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33楼2013-09-07 23:33:28
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
34楼: Originally posted by 小雨莎莎 at 2013-09-08 09:26:02
老板不让多做啊，但是必须要做出来才能有结果啊~...

不做是没有结果的  不管好坏

你们老师真奇葩
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35楼2013-09-08 23:07:21
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
38楼: Originally posted by 小雨莎莎 at 2013-09-09 18:21:49
再问一下哦，能用苏木精染色么？...

不知道   试剂盒给了  没想别的

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39楼2013-09-09 19:09:39
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
40楼: Originally posted by 小雨莎莎 at 2013-09-10 16:35:29
那这个结晶紫染色试剂盒货号是多少啊？...

milipore的  ecm550好像是这个货号

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41楼2013-09-10 17:04:00
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