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whyxmc

新虫 (初入文坛)

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专业: 药剂学

[求助] 大鼠肠内菌孵育实验

小妹做的是大鼠肠内菌代谢研究实验，有好多问题不解，请教各位虫友：
1：查阅大量文献，方法主要分为两类，一是用厌氧稀释液直接与大鼠粪便孵育，一是粪便用厌氧稀释液稀释好后，再用厌氧培养基（GAM）培养基培养，但用到这种方法大多都是孵育人粪便的，不知道在做大鼠粪便孵育需不需要用到GAM培养基，如果可直接用厌氧稀释液孵育，以下方法可否：
大鼠新鲜粪便与生理盐水按比例1g:4ml混合制成悬浊液，2000r•min，离心 10min后得上清液，即为肠道菌液。取10ml肠道菌液加入到90ml厌氧培养液中，混匀后得肠菌培养液。取上述菌液各6ml，分别加药物xxmg（应为多少mg是不是也要摸索还是说有差不多的条件），混匀溶解，再将混匀的溶液分装 (0.5ml/管)，于37℃厌氧条件下培养O、1、2、4、6、8、10、16、24、36、48h，加甲醇 0.5ml终止反应，漩涡振荡 2min，1000Or•min，离心 10nin，取上清液进lc—ms。同时做空白实验。
2：在配置厌氧稀释液的时候出现了白色沉淀，我是按照下列方法配置的
溶液A：0.78% K2HPO4。
溶液B：0.47% KH2PO4 1.18%NaCl 1.2%(NH4)2SO4 0.12%CaCl2 0.45%MgSO4•7H2O。
溶液C：8.0%Na2CO3。
厌氧稀释液：A37.5ml+B37.5ml+C50ml +0. 5g半胱氨酸，2ml 25% L -抗坏血酸，1g牛肉膏，1g蛋白胨，1g营养琼脂，双蒸水定容至1L，用1mol/L的盐酸调至PH至7.5~8.0。
配了好几次了，试剂没有过期的，质量也都是按照以上严格来称量的，但就是再加C液碳酸钠的时候出现了絮状沉淀，怀疑是碳酸钙沉淀，高温高压灭菌后依然存在，这是怎么回事呢？难道与加入顺序有关？如能回答小妹不胜感激，金币奉送啊！

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1楼 2013-08-10 22:10:02

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whyxmc

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 落叶梧桐 at 2013-08-16 20:41:40
1.确实有这个问题，我最近做也是这样。但是稀释至1L后放在冰箱，第二天在瓶底出现的是一层结晶，不知是什么。
2.灭菌后放凉竟然在瓶底出现了凝结成块的琼脂。
3.后期除氧也遇到了问题，一直不能把培养基中的氧除去 ...

我的灭菌后是有点絮状的白色沉淀，但是我直接做了下，发现了一个很奇怪的现象，菌+药+培养液不定时取样时，发现随着时间越长，颜色越黄，而对照组菌+培养液的一直都是澄清的颜色没有变化。当然这两组都是在厌氧培养袋里的，另外剩了一些菌和培养液，我用石蜡密封放在培养箱里，却随时间变黑。这是怎么回事，是用石蜡密封性不好还是菌液长得太多就会变黑呢？但是对照组并没有变黑啊？