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[求助]
3‘s race PCR问题
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求助哪个伙伴帮分析，我的prog是 94C 3min 94 30s 55 30s 72 90s 72 3min 4 1min 然后开始是35循环，二次PCR是38循环，有很多杂带，有一条杂带1000多很亮，目的带没有（估计目的带为400） 然后听同学建议，二次PCR跑的55循环，还是很多杂带，仍一带带1000多很亮， 第三次实验，是一次PCR，45循环，仍杂带，目的带无，有一条1000多亮杂带。 求哪位大伙伴，小伙伴帮助！！！我是新虫，不懂还请指教 |
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嗯，也怀疑过。但同学讲因为takara试剂盒的原理，是认为你的基因表达量相对高的情况下的，我的基因表达量假如不算太高的话，循环多点保险。这是跟有经验的同学请教的，以前他跑不出来，人家告诉他跑到45循环，PCR聚合酶的保真效果也还可以，基因表达量低，应该多跑点循环，所以。。。。。 现在新的问题是，昨天的跑胶图 20微升体系貌似跑出来了，200多bp。所以我今天又跑了一个30微升体系 同样的program 图却变了，变成了700－800bp，重复性没有出现，现在很纳闷（之前用内参基因看cDNA是否有基因组DNA污染，发现是有微弱的污染的）是否700－800bp是基因组DNA。  如上图，现在是送第一道700多bp和第4道200多bp去测序了，等结果。。。。。 |
15楼2013-08-06 17:34:11
Fleaves
至尊木虫 (著名写手)
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2楼2013-08-04 01:30:36
Sthunder
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- 专业: 生物化学
3楼2013-08-04 04:08:56
4楼2013-08-04 19:56:57
200