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scgrong

铁虫 (初入文坛)

[求助] northern洗膜时需要注意RNA酶吗

northern洗膜时还需要注意RNA酶污染吗?有谁知道northern哪一步开始就不需要注意RNA酶了,还是全程都需要注意呢?
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努力过就不后悔
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠

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感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-01 12:08:11
只要转膜固定以后RNA已经趋于稳定,RNA酶对于实验结果的影响就不是很大了!最好是能全程注意!
麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起,么有鱼丸粗面。。那,我要鱼丸么有鱼丸那,我要粗面…………么有粗面那,我要鱼丸粗面……………………
2楼2013-07-31 18:00:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-01 16:18:51
scgrong: 金币+5 2013-08-11 11:01:05
洗膜时不用注意。只要RNA经cross link到膜上后面的杂交是在蛋白变性条件下(含SDS)进行的。
3楼2013-08-01 00:51:11
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scgrong

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-01 00:51:11
洗膜时不用注意。只要RNA经cross link到膜上后面的杂交是在蛋白变性条件下(含SDS)进行的。

谢谢啊,那杂交的时候是要注意的?
努力过就不后悔
4楼2013-08-01 08:03:58
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scgrong

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mgangle at 2013-07-31 18:00:31
只要转膜固定以后RNA已经趋于稳定,RNA酶对于实验结果的影响就不是很大了!最好是能全程注意!

我的师姐说杂交后就不用注意了,但是我看说明书上说要保证无RNA 酶,之前我做得时候就是按照我师姐教的做得,有的做得出来有的做不出来。
努力过就不后悔
5楼2013-08-01 08:08:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-01 12:08:20
引用回帖:
4楼: Originally posted by scgrong at 2013-08-01 08:03:58
谢谢啊,那杂交的时候是要注意的?...

杂交时没什么要注意的,主要是预杂交后加探针时需要把探针95°C变性后趁热加,否则效果不好。
6楼2013-08-01 10:03:08
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠

引用回帖:
5楼: Originally posted by scgrong at 2013-08-01 08:08:09
我的师姐说杂交后就不用注意了,但是我看说明书上说要保证无RNA 酶,之前我做得时候就是按照我师姐教的做得,有的做得出来有的做不出来。...

在马来酸加吐温冲洗开始,我们用的马来酸就没有再灭过菌,结果也还不错!
麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起,么有鱼丸粗面。。那,我要鱼丸么有鱼丸那,我要粗面…………么有粗面那,我要鱼丸粗面……………………
7楼2013-08-01 14:22:33
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