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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » northern洗膜时需要注意RNA酶吗
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scgrong

铁虫 (初入文坛)

[求助] northern洗膜时需要注意RNA酶吗

northern洗膜时还需要注意RNA酶污染吗？有谁知道northern哪一步开始就不需要注意RNA酶了，还是全程都需要注意呢？
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努力过就不后悔
1楼 2013-07-31 14:28:58
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-01 12:08:11
只要转膜固定以后RNA已经趋于稳定，RNA酶对于实验结果的影响就不是很大了！最好是能全程注意！
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
2楼2013-07-31 18:00:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-01 16:18:51
scgrong: 金币+5 2013-08-11 11:01:05
洗膜时不用注意。只要RNA经cross link到膜上后面的杂交是在蛋白变性条件下（含SDS）进行的。
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3楼2013-08-01 00:51:11
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scgrong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-01 00:51:11
洗膜时不用注意。只要RNA经cross link到膜上后面的杂交是在蛋白变性条件下（含SDS）进行的。

谢谢啊，那杂交的时候是要注意的？
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努力过就不后悔
4楼2013-08-01 08:03:58
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scgrong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mgangle at 2013-07-31 18:00:31
只要转膜固定以后RNA已经趋于稳定，RNA酶对于实验结果的影响就不是很大了！最好是能全程注意！

我的师姐说杂交后就不用注意了，但是我看说明书上说要保证无RNA 酶，之前我做得时候就是按照我师姐教的做得，有的做得出来有的做不出来。
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努力过就不后悔
5楼2013-08-01 08:08:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-01 12:08:20
引用回帖:
4楼: Originally posted by scgrong at 2013-08-01 08:03:58
谢谢啊，那杂交的时候是要注意的？...

杂交时没什么要注意的，主要是预杂交后加探针时需要把探针95°C变性后趁热加，否则效果不好。
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6楼2013-08-01 10:03:08
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠
引用回帖:
5楼: Originally posted by scgrong at 2013-08-01 08:08:09
我的师姐说杂交后就不用注意了，但是我看说明书上说要保证无RNA 酶，之前我做得时候就是按照我师姐教的做得，有的做得出来有的做不出来。...

在马来酸加吐温冲洗开始，我们用的马来酸就没有再灭过菌，结果也还不错！
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
7楼2013-08-01 14:22:33
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