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atlanticwi金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
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[求助]
关于使载体平末端环化的问题
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嗯...............好久木有冒泡，决定核潜艇上浮一番~ 刚好实验也有点问题，想求助各位 具体情况如下： 需要构建一个新载体，想法是从现有载体上直接去除一部分序列就会成为我要的载体，所以采用PCR的方法，反向扩增了这个载体我需要的部分，然后用激酶处理这个线性片段后，想用连接酶环化此片段。 问题出现在： 需要的载体片段约有11kb左右，环化线性片段会非常困难，我试过几次均未成功，看有些资料显示，越长的片段可能形成多聚体的概率会越大。 想问一下是否能有什么添加剂或者方法之类的，促进长片段DNA的自我环化连接呢？ 盼高手出现，给予指点。或大家集思广益，共同探讨，共同进步~ |
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