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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 原核表达蛋白时标签无论在N端还是C端蛋白折叠时都被折进去了，怎么办
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蛋炒饭1989

金虫 (小有名气)

[求助] 原核表达蛋白时标签无论在N端还是C端蛋白折叠时都被折进去了，怎么办

各位虫虫好，我最近在做原核表达蛋白，用的标签是HIS-tag，发现标签无论是在N端还是在C端，蛋白折叠时都把它折进去了，纯化不了。我现在想的是是不是可以让蛋白什么标签都不带，按分子量去分。我的方向本来是电化学的，分子方面的很多都不懂，下一步不知道肿么办，求虫虫指点。
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春暖花开
1楼 2013-07-31 11:04:14
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蛋炒饭1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-07-31 17:48:00
我想到4个办法:
办法1: 把发HIS换成GST, 因为GST自己有结构, 缺点是对目标蛋白的功能结构可能有破坏性的影响.
办法2: 在HIS和目标蛋白之间加linker, 比方说GGSGGSGGS, 使得HIS和目标蛋白的距离疏远些从而有机会不 ...

这些个对我们实验室来说貌似挺难的……我现在时间比较紧，明年年初就毕业了，所以想要找个简便的方法，谢谢你哈
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春暖花开
14楼2013-08-01 20:24:48
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bleach060452

新虫 (小有名气)
★ ★
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流！ 2013-07-31 18:50:41
看你蛋白用来干啥了，要不要活性？

至于蛋白的分离纯化，这也不属于分子生物学的~~想用其他方法纯化，那就需要看你蛋白的特性、杂蛋白的影响了
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-07-31 11:43:14
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欧阳-90

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蛋炒饭1989: 金币+3 2013-08-01 20:27:42
我不是很懂呀，你的折叠进去后蛋白是上清中表达还是包涵体形式？而且如果不需要活性的话，你是不是可以让蛋白变性舒展开呢？
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3楼2013-07-31 12:10:54
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蛋炒饭1989

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 欧阳-90 at 2013-07-31 12:10:54
我不是很懂呀，你的折叠进去后蛋白是上清中表达还是包涵体形式？而且如果不需要活性的话，你是不是可以让蛋白变性舒展开呢？

是在上清中，我的蛋白需要活性
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春暖花开
4楼2013-07-31 12:26:37
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