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stfo

铜虫 (小有名气)

[求助] 真菌原生质体转化法的片段插入方式

虚心请教
把质粒或是pcr产物用PEG介导的原生质体转化到真菌基因组中，质粒或是pcr片段是怎么插入的，求高人详细讲解

如果是用农杆菌转化的话，是将质粒上左右两臂之间的片段随机插入到基因组中，那原生质体转化是什么情况呢

多谢了
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1楼 2013-07-29 16:54:40
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chengfs

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-31 22:41:05
我用限制性内切酶酶切后导入（REMI）。用tail-PCR发现是随机插入的。
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2楼2013-07-31 21:32:35
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indica

铁虫 (初入文坛)
若两侧有同源臂，则可能会以同源重组交换的方式，定向插入或定向敲除某片段。但同时也会有非同源重组的转化子出现。
若没有同源臂，则也是以随机插入的方式进行的。

农杆菌的原理也是一样，只不过农杆菌做为介导，会把left border及right border之间的片段做为线性DNA运到真菌内，再同源重组或者是随机插入而已。这样就增高了插入的效率。
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3楼2013-08-01 00:35:15
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