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stfo

铜虫 (小有名气)

[求助] 真菌原生质体转化法的片段插入方式

虚心请教
把质粒或是pcr产物用PEG介导的原生质体转化到真菌基因组中,质粒或是pcr片段是怎么插入的,求高人详细讲解

如果是用农杆菌转化的话,是将质粒上左右两臂之间的片段随机插入到基因组中,那原生质体转化是什么情况呢

多谢了
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chengfs

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-31 22:41:05
我用限制性内切酶酶切后导入(REMI)。用tail-PCR发现是随机插入的。
2楼2013-07-31 21:32:35
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indica

铁虫 (初入文坛)

若两侧有同源臂,则可能会以同源重组交换的方式,定向插入或定向敲除某片段。但同时也会有非同源重组的转化子出现。
若没有同源臂,则也是以随机插入的方式进行的。

农杆菌的原理也是一样,只不过农杆菌做为介导,会把left border及right border之间的片段做为线性DNA运到真菌内,再同源重组或者是随机插入而已。这样就增高了插入的效率。
3楼2013-08-01 00:35:15
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