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学术问题

银虫 (小有名气)

[求助] 有关半定量实验结果图片的问题!!切切!1

我是做了个梯度PCR  退火温度是 56  58度   但是条带特别的模糊  35个循环  求分析这是为什么? 应该怎么办呢? 我以前也没做过啊 (其中最亮的是内参,左侧是56度  右侧是58度  其他几个基因太模糊  能用吗?)
有关半定量实验结果图片的问题!!切切!1
56 58 退火(1234567+内参)swzx 2013-07-26 22hr 23min.jpg

[ Last edited by 学术问题 on 2013-7-27 at 10:35 ]
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微生物小硕
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370769676

银虫 (正式写手)

个人感觉退火温度要升高,再不行那就是你的引物特异性的问题了!
8楼2013-07-27 23:29:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩。热心的顾问 2013-07-27 13:53:19
出现多条带,而且有明显的引物二聚体,说明PCR效果差。可能是引物特异性不好、退火温度不合适,或者是模板质量不好。
2楼2013-07-27 12:50:04
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biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 13:53:31
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3楼2013-07-27 12:54:44
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孙妙妙

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的图标的不清楚,没发具体分析,还有你的引物设计的不行,怎么有那么多非特异扩增。另外半定量循环数一般不超出过30个,还有你是用的什么PCR体系,Mix还是分开Tag酶。有很多关于半定量的文章,可以好好看看,希望对你有帮助
好好做实验!
4楼2013-07-27 15:57:15
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