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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关半定量实验结果图片的问题！！切切！1
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学术问题

银虫 (小有名气)

[求助] 有关半定量实验结果图片的问题！！切切！1

我是做了个梯度PCR  退火温度是 56  58度   但是条带特别的模糊  35个循环  求分析这是为什么？ 应该怎么办呢？ 我以前也没做过啊 （其中最亮的是内参，左侧是56度  右侧是58度  其他几个基因太模糊  能用吗？）
有关半定量实验结果图片的问题！！切切！1
56 58 退火(1234567+内参)swzx 2013-07-26 22hr 23min.jpg

[ Last edited by 学术问题 on 2013-7-27 at 10:35 ]
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微生物小硕
1楼 2013-07-27 10:33:40
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学术问题

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by grape_vine at 2013-07-29 08:15:00
我看很多人都说了35个循环有点多,但是从楼主的图来看, 确实不多.再少估计就扩增不出来了.
引物的特异性应该是有问题的. 不知道你59度的结果怎么样, 如果不行 还是要调整PCR反映体系.不知道你用的是什么mix, 质量如 ...

59度  什么都没有  我都无语了
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微生物小硕
13楼2013-07-29 08:36:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。热心的顾问 2013-07-27 13:53:19
出现多条带，而且有明显的引物二聚体，说明PCR效果差。可能是引物特异性不好、退火温度不合适，或者是模板质量不好。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-07-27 12:50:04
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biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 13:53:31
本帖内容被屏蔽
3楼2013-07-27 12:54:44
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孙妙妙

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的图标的不清楚，没发具体分析，还有你的引物设计的不行，怎么有那么多非特异扩增。另外半定量循环数一般不超出过30个，还有你是用的什么PCR体系，Mix还是分开Tag酶。有很多关于半定量的文章，可以好好看看，希望对你有帮助
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好好做实验！
4楼2013-07-27 15:57:15
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