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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA提取时260/280比值为什么总是偏低？
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吃货把子肉

金虫 (小有名气)

[求助] DNA提取时260/280比值为什么总是偏低？

我用天根的试剂盒提取DNA时260/230比值总是比较低，实验操作中应当注意什么？各位大能指点一下
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1楼 2013-07-24 16:48:48
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changes

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-25 10:20:02
260/230比值较低？低到什么程度？可能是蛋白去除的不彻底，或者洗脱液中离子浓度较高吧。

既然是试剂盒，还是问天根的技术支持吧。

没有用过这种盒子。
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2楼2013-07-24 21:33:01
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吃货把子肉

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by changes at 2013-07-24 21:33:01
260/230比值较低？低到什么程度？可能是蛋白去除的不彻底，或者洗脱液中离子浓度较高吧。

既然是试剂盒，还是问天根的技术支持吧。

没有用过这种盒子。

1.7左右，最低的时候是1.2，其他同事都提的挺好，就我的不行，也没找到原因
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3楼2013-07-25 08:07:59
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孤城一片

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
吃货把子肉(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-25 10:20:12
吃货把子肉: 金币+1, ★有帮助 2013-07-25 10:27:21
用同事的方法提一次，试试看不就行了，一般来说，低这么多应该是有蛋白污染，跑个带传个图瞧瞧
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本意探花郎，奈何芷若香；寄意予青陆，共沐好蟾光。
4楼2013-07-25 08:40:22
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
吃货把子肉(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-25 10:20:23
吃货把子肉: 金币+2, ★有帮助 2013-07-25 10:27:13
老实说260/230只要不是实验要求很过分，或者你后续实验对盐离子不是那种非常特别很十分敏感的话，不影响。
另外，1.2或1.7其实已经是不错的了。个人认为不必吹毛求疵。
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伟大航线....
5楼2013-07-25 09:22:42
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biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)
这个ratio低说明蛋白污染多了
可以考虑下蛋白denature那步是不是充分了，

从哪儿提？从E coli里面么?
有的质粒扩增起来yield比较低，也导致这个ratio会低。你同事提的和你提的同一个质粒么？不是的话，也可以考虑多摇些菌

再就是你的用途是什么？这个ratio对做转染可能会有影响。但是做克隆的话问题不大
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6楼2013-07-25 11:20:55
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芳芳在考研

银虫 (小有名气)
纯度好的DNA或RNA，在pH7-8.5 下A260 / A280的比值应该在2.0 或2.5。 纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、盐（胍盐）等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。
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努力。。。
7楼2013-07-25 16:35:44
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tellman12

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
8楼2013-07-29 09:48:02
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northspring

新虫 (初入文坛)
你测定OD值是用什么稀释RNA的，如果用水，就会很低；要是用10mMOL tris-cl，就会在1.8-2.2之间。好好查看你的protoctol。是用什么方法提的？
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9楼2014-01-19 05:25:27
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