24小时热门版块排行榜    

查看: 8154  |  回复: 26
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yxliu

金虫 (小有名气)

[求助] 引物退火温度怎么确定?

我的上游引物Tm(50mmna+)67.5,GC%73.3,下游引物Tm56.5,GC%46.7.PCR退火温度设置50-64,电泳都没有跑出条带,但用别人的引物能够跑出。退火温度设置不合适还是需要重新设引物。新手求教。谢谢。
回复此楼
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxliu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
25楼: Originally posted by wxl.1989822 at 2013-07-26 08:51:32
试一下touchdown吧 cDNA不太好P td效果会好些

谢谢建议。
27楼2013-07-26 14:37:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yxliu: 金币+1, 有帮助 2013-07-24 14:59:40
yxliu: 金币+1 2013-07-24 21:35:38
PCR目的片段多大,模板是什么,把具体体系和程序写下来。
2楼2013-07-24 12:59:34
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-24 13:12:56
yxliu: 金币+1, 要做的方向不一样。。。。 2013-07-24 14:59:09
别人的引物能跑出来,那就说明 你的引物不是特别好。
另外还想对楼主说一句,不要总是纠结自己一定做好每一步,如果别人的能用就用别人,毕竟实验最终的目的才是最重要的。
3楼2013-07-24 13:06:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxliu

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-24 12:59:34
PCR目的片段多大,模板是什么,把具体体系和程序写下来。

目的片段1300多,模板cDNA。用的20ul的体系,引物各1,模板2,2xTaq 10,水补足。程序94度预变性5min.变性30s退火梯度50-64.30s,延伸72度90s。32个循环。最后72度10min。我想提高退火温度再试试。
4楼2013-07-24 14:56:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-30 22:24 by xiangy672
[基金申请] 能否申诉? +4 echo8914667 2026-08-30 5/250 2026-08-30 21:11 by echo8914667
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 18/900 2026-08-30 16:47 by 黄鸟于飞Chao
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见