应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物退火温度怎么确定？
52/1返回列表
查看: 8153  |  回复: 26
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yxliu

金虫 (小有名气)

[求助] 引物退火温度怎么确定？

我的上游引物Tm（50mmna+）67.5，GC%73.3，下游引物Tm56.5，GC%46.7.PCR退火温度设置50-64，电泳都没有跑出条带，但用别人的引物能够跑出。退火温度设置不合适还是需要重新设引物。新手求教。谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-07-24 12:37:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yilunanxia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得你的引物得重新设计了，上游引物和下游引物的Tm值相差这么大真的很难P出条带
赞一下 回复此楼
17楼2013-07-25 14:53:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yxliu: 金币+1, ★有帮助 2013-07-24 14:59:40
yxliu: 金币+1 2013-07-24 21:35:38
PCR目的片段多大，模板是什么，把具体体系和程序写下来。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-24 12:59:34
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-24 13:12:56
yxliu: 金币+1, 要做的方向不一样。。。。 2013-07-24 14:59:09
别人的引物能跑出来，那就说明 你的引物不是特别好。
另外还想对楼主说一句，不要总是纠结自己一定做好每一步，如果别人的能用就用别人，毕竟实验最终的目的才是最重要的。
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-24 13:06:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxliu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-24 12:59:34
PCR目的片段多大，模板是什么，把具体体系和程序写下来。

目的片段1300多，模板cDNA。用的20ul的体系，引物各1，模板2,2xTaq 10，水补足。程序94度预变性5min.变性30s退火梯度50-64.30s，延伸72度90s。32个循环。最后72度10min。我想提高退火温度再试试。
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-24 14:56:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 27 个回答
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 18:20 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 18:18 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 18:07 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 17:56 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 17:45 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 17:03 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 能否申诉？ +4 echo8914667 2026-08-30 4/200 2026-08-30 16:03 by sundiv
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +3 雨打竹帘 2026-08-30 4/200 2026-08-30 12:35 by 白大多亮
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:14 by l0VvVHGBGRLv
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 02:40 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭