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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 防止puc19载体自连 XcmI酶
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wei_suzhen

新虫 (小有名气)

[求助] 防止puc19载体自连 XcmI酶

现在用XcmI酶切puc19载体，37°，6h；回收的酶切产物与目的基因按0.5：7.5比例连接，菌落PCR验证，几乎都是假阳性；做载体自连实验，载体自连很严重，怎么可以减少载体自连？
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1楼 2013-07-21 20:54:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wei_suzhen(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-21 23:07:33
单酶切或者两个平末端酶切时可以用磷酸酶处理载体，去掉载体的5'P，载体只能和带有5'p的插入片段连接，理论上可以避免载体自连。
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3楼2013-07-21 21:25:36
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖应助！ 2013-07-21 21:22:35
载体酶切判断用去磷酸化酶处理，可以有效减少自连
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-07-21 21:15:58
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