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wei_suzhen

新虫 (小有名气)

[求助] 防止puc19载体自连 XcmI酶

现在用XcmI酶切puc19载体,37°,6h;回收的酶切产物与目的基因按0.5:7.5比例连接,菌落PCR验证,几乎都是假阳性;做载体自连实验,载体自连很严重,怎么可以减少载体自连?
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖应助! 2013-07-21 21:22:35
载体酶切判断用去磷酸化酶处理,可以有效减少自连
2楼2013-07-21 21:15:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wei_suzhen(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-21 23:07:33
单酶切或者两个平末端酶切时可以用磷酸酶处理载体,去掉载体的5'P,载体只能和带有5'p的插入片段连接,理论上可以避免载体自连。
3楼2013-07-21 21:25:36
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