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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助~~~试剂盒提取土壤DNA为棕色
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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助~~~试剂盒提取土壤DNA为棕色

第一次提取DNA，用的是国产的试剂盒，有几个样品提出来是棕色的，跑了1%的琼脂糖，完全没有条带。（应该是试剂盒问题）
之后用通用细菌引物做pcr，棕色的几个样品都没有条带，透明的倒是有。确切的说是透明的有两个条带，棕色的一个，都在最下端，这个是引物二聚体么？
瓶颈，求指点，接下来该怎么做，查了很多，现在觉得可能是DNA中有腐殖酸的原因……是不是需要把这几个样重新提取一下？？
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1楼 2013-07-17 12:04:16
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 13:05:19
对的，土壤DNA抽提最大的问题就是含有大量的腐殖酸，严重影响后期操作。
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2楼2013-07-17 12:34:23
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毛毛讨厌猫

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-17 12:34:23
对的，土壤DNA抽提最大的问题就是含有大量的腐殖酸，严重影响后期操作。

可我也不确定是不是腐殖酸，那怎么确定呢？
还有就是别的看着透明的液体就确定不用重新提取了么？
为什么提取出来的DNA跑琼脂糖完全没有条带，是含量太少的缘故么？
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3楼2013-07-17 14:02:52
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
毛毛讨厌猫(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-07-18 17:49:52
主要是我的一个同学正在做土样细菌宏基因组文库的构建，之前他也遇到同样的问题。液体有颜色说明腐殖酸含量高。  跟琼脂糖没有条带，应该是含量太少了。
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4楼2013-07-17 14:19:24
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兰陵初见

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用异硫氰酸胍多洗几次~~~
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5楼2013-07-18 15:58:02
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羽化成蝉

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用PowerClean DNA Clean-Up kit去除粗提DNA的腐殖酸，就可以PCR了。或者直接用PowerSoil 去提
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6楼2013-08-16 16:19:38
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