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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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echochen1017

新虫 (初入文坛)


[交流] 质粒上定点突变不用DpnI酶消化的后果

本人在已构建成功的重组质粒上定点突变,但没有使用消化酶,直接转化,有转化子,提质粒,测序,却发现在设计好的位点没有发生突变,想交流一下,是否跟消化酶有关,想知道整个详细的PCR过程和转化后在质粒模板和PCR产物在宿主菌中复制克隆的效率。谢谢啦~~~
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shanqian1988

铜虫 (小有名气)


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echochen1017: 金币+1 2013-07-17 11:45:45
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-07-19 00:04:51
一般用DpnI消化后转化长出来还有20%-30%是你的原始模板呢,所以如果不消化,结果真的很不理想的
8楼2013-07-17 11:06:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


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echochen1017: 金币+1 2013-07-17 11:46:26
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-17 11:53:59
DpnI酶是要消化掉模板质粒。如果没有做消化直接转化,当然有可能没有突变啦。质粒的转化效率非常高,如果没有消化掉模板,你得到的克隆基本上应该都是原质粒。
2楼2013-07-17 09:48:30
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huanghznd

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用DpnIi消化是一方面,但如果转大肠杆菌DMT的话,是否消化关系不大。一般正确率在99%以上。
3楼2013-07-17 10:06:55
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echochen1017

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
3楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-17 10:06:55
用DpnIi消化是一方面,但如果转大肠杆菌DMT的话,是否消化关系不大。一般正确率在99%以上。

转的是DH5α,最后的质粒里突变的产物能占多少呢?
4楼2013-07-17 10:12:17
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