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alert_pqs

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot中ECL显影后常规预染Marker居然被显影出来

抗体是Abcam买的原装进口的单克隆抗体,但出现如标题的情况,就解?  一抗 特异性不强?如下图:
western blot中ECL显影后常规预染Marker居然被显影出来
1.jpg
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by alert_pqs at 2013-07-16 14:08:22
应该 不会,,我 的 内参的 marker没有显影出来。只有目标蛋白的marker被显影出来 ,而且是以块PVDF膜上剪开的!    marker显影出来还 无所谓  但后面的 非特异性条带也太多了!...

可能是目标蛋白的一抗特异性差。是买的抗体还是自己做的?
6楼2013-07-16 15:38:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
alert_pqs(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-16 10:06:07
看你预染的marker是什么蛋白,有时候二抗会识别marker中的某些蛋白。
2楼2013-07-16 01:31:24
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 01:31:24
看你预染的marker是什么蛋白,有时候二抗会识别marker中的某些蛋白。

应该不是二抗加多了的原因,最开始我二抗是1:2000稀释,结果每次北京都很高,后来用1:10000稀释 就变这样了 !
3楼2013-07-16 09:59:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by alert_pqs at 2013-07-16 09:59:38
应该不是二抗加多了的原因,最开始我二抗是1:2000稀释,结果每次北京都很高,后来用1:10000稀释 就变这样了 !...

我不是指二抗加多了。我是说二抗有时候会识别marker中的某些蛋白,就像识别一抗igG那样,所以会显出带来。
4楼2013-07-16 11:15:46
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