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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot中ECL显影后常规预染Marker居然被显影出来
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot中ECL显影后常规预染Marker居然被显影出来

抗体是Abcam买的原装进口的单克隆抗体，但出现如标题的情况，就解？  一抗 特异性不强？如下图：
western blot中ECL显影后常规预染Marker居然被显影出来
1.jpg
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1楼 2013-07-15 14:16:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
alert_pqs(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-16 10:06:07
看你预染的marker是什么蛋白，有时候二抗会识别marker中的某些蛋白。
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2楼2013-07-16 01:31:24
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 01:31:24
看你预染的marker是什么蛋白，有时候二抗会识别marker中的某些蛋白。

应该不是二抗加多了的原因，最开始我二抗是1:2000稀释，结果每次北京都很高，后来用1:10000稀释 就变这样了 ！
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3楼2013-07-16 09:59:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by alert_pqs at 2013-07-16 09:59:38
应该不是二抗加多了的原因，最开始我二抗是1:2000稀释，结果每次北京都很高，后来用1:10000稀释 就变这样了 ！...

我不是指二抗加多了。我是说二抗有时候会识别marker中的某些蛋白，就像识别一抗igG那样，所以会显出带来。
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4楼2013-07-16 11:15:46
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 11:15:46
我不是指二抗加多了。我是说二抗有时候会识别marker中的某些蛋白，就像识别一抗igG那样，所以会显出带来。...

应该 不会，，我 的 内参的 marker没有显影出来。只有目标蛋白的marker被显影出来 ，而且是以块PVDF膜上剪开的！    marker显影出来还 无所谓  但后面的 非特异性条带也太多了！
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5楼2013-07-16 14:08:22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by alert_pqs at 2013-07-16 14:08:22
应该 不会，，我 的 内参的 marker没有显影出来。只有目标蛋白的marker被显影出来 ，而且是以块PVDF膜上剪开的！    marker显影出来还 无所谓  但后面的 非特异性条带也太多了！...

可能是目标蛋白的一抗特异性差。是买的抗体还是自己做的？
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6楼2013-07-16 15:38:18
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 15:38:18
可能是目标蛋白的一抗特异性差。是买的抗体还是自己做的？...

应该不会吧 ！上面说了的 买的是Abcam和pierce的原装进口的单克隆抗体！
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7楼2013-07-16 16:15:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-17 00:39:33
alert_pqs: 金币+2, ★有帮助 2013-07-17 11:05:12
引用回帖:
7楼: Originally posted by alert_pqs at 2013-07-16 16:15:36
应该不会吧 ！上面说了的 买的是Abcam和pierce的原装进口的单克隆抗体！...

我用过一个sigma单克隆抗体会特异识别prie-stained marker中的一条。其它抗体没有这个现象。我觉得这是正常现象，与一抗有关的。反正做样品的western，不用管marker是否曝出条带吧。
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8楼2013-07-17 00:01:20
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龙鱼1979

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
alert_pqs: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-07-19 09:45:02
我以前也用过abcam的东西，也是这样的结果，后来老大分析说，可能是蛋白降解了，亚基都能被识别，还有就是Marker本身的原因，能被二抗识别
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9楼2013-07-17 14:38:53
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alert_pqs

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by 龙鱼1979 at 2013-07-17 14:38:53
我以前也用过abcam的东西，也是这样的结果，后来老大分析说，可能是蛋白降解了，亚基都能被识别，还有就是Marker本身的原因，能被二抗识别

蛋白降解到有可能！现在主要问题是 目的条带出不来，杂带有太多！！
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10楼2013-07-19 09:44:49
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