24小时热门版块排行榜    

查看: 8212  |  回复: 10

alert_pqs

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot中ECL显影后常规预染Marker居然被显影出来

抗体是Abcam买的原装进口的单克隆抗体,但出现如标题的情况,就解?  一抗 特异性不强?如下图:
western blot中ECL显影后常规预染Marker居然被显影出来
1.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
alert_pqs(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-16 10:06:07
看你预染的marker是什么蛋白,有时候二抗会识别marker中的某些蛋白。
2楼2013-07-16 01:31:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alert_pqs

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 01:31:24
看你预染的marker是什么蛋白,有时候二抗会识别marker中的某些蛋白。

应该不是二抗加多了的原因,最开始我二抗是1:2000稀释,结果每次北京都很高,后来用1:10000稀释 就变这样了 !
3楼2013-07-16 09:59:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by alert_pqs at 2013-07-16 09:59:38
应该不是二抗加多了的原因,最开始我二抗是1:2000稀释,结果每次北京都很高,后来用1:10000稀释 就变这样了 !...

我不是指二抗加多了。我是说二抗有时候会识别marker中的某些蛋白,就像识别一抗igG那样,所以会显出带来。
4楼2013-07-16 11:15:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alert_pqs

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 11:15:46
我不是指二抗加多了。我是说二抗有时候会识别marker中的某些蛋白,就像识别一抗igG那样,所以会显出带来。...

应该 不会,,我 的 内参的 marker没有显影出来。只有目标蛋白的marker被显影出来 ,而且是以块PVDF膜上剪开的!    marker显影出来还 无所谓  但后面的 非特异性条带也太多了!
5楼2013-07-16 14:08:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by alert_pqs at 2013-07-16 14:08:22
应该 不会,,我 的 内参的 marker没有显影出来。只有目标蛋白的marker被显影出来 ,而且是以块PVDF膜上剪开的!    marker显影出来还 无所谓  但后面的 非特异性条带也太多了!...

可能是目标蛋白的一抗特异性差。是买的抗体还是自己做的?
6楼2013-07-16 15:38:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alert_pqs

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 15:38:18
可能是目标蛋白的一抗特异性差。是买的抗体还是自己做的?...

应该不会吧 !上面说了的 买的是Abcam和pierce的原装进口的单克隆抗体!
7楼2013-07-16 16:15:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-07-17 00:39:33
alert_pqs: 金币+2, 有帮助 2013-07-17 11:05:12
引用回帖:
7楼: Originally posted by alert_pqs at 2013-07-16 16:15:36
应该不会吧 !上面说了的 买的是Abcam和pierce的原装进口的单克隆抗体!...

我用过一个sigma单克隆抗体会特异识别prie-stained marker中的一条。其它抗体没有这个现象。我觉得这是正常现象,与一抗有关的。反正做样品的western,不用管marker是否曝出条带吧。
8楼2013-07-17 00:01:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

龙鱼1979

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
alert_pqs: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-07-19 09:45:02
我以前也用过abcam的东西,也是这样的结果,后来老大分析说,可能是蛋白降解了,亚基都能被识别,还有就是Marker本身的原因,能被二抗识别
9楼2013-07-17 14:38:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alert_pqs

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 龙鱼1979 at 2013-07-17 14:38:53
我以前也用过abcam的东西,也是这样的结果,后来老大分析说,可能是蛋白降解了,亚基都能被识别,还有就是Marker本身的原因,能被二抗识别

蛋白降解到有可能!现在主要问题是 目的条带出不来,杂带有太多!!
10楼2013-07-19 09:44:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 alert_pqs 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +8 ziyangfang 2026-08-25 11/550 2026-09-01 09:51 by zzuzxg
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
信息提示
请填处理意见