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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

[求助] 求助,银染法背景色颜色深

用的聚丙烯跑的DNA,显色的时候背景色极深
1、1%冰醋酸固定30min
2、漂洗3次,2min/次
3、2g硝酸银,3ml甲醛,2L水进行银染30分钟
4、漂洗5s
5、60g碳酸钠,3ml甲醛,400ul硫酸硫酸钠(10mg/ml),2L水,进行显影
6、终止显色
显色的时候胶版放下去5分钟左右整块就黑了,有点墨绿色的,看不到DNA条带,要拿出来对照白纸才能看见
求助,银染法背景色颜色深
DSC06985.JPG
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小鱼尾

新虫 (初入文坛)

你换种银染的方法
2楼2013-07-27 17:39:49
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

染色后洗涤时间过短!
互助互励,共奋共进!!
3楼2013-07-27 21:17:00
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小鱼尾 at 2013-07-27 17:39:49
你换种银染的方法

我换了种方法,背景成黄色的,染了很久才出DNA条带,别人的都是几分钟就能出带了,难道是我选扩体系有问题?
4楼2013-07-29 15:38:31
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-27 21:17:00
染色后洗涤时间过短!

我的条带很弱,有什么改进的方法吗?
5楼2013-07-29 15:39:08
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小鱼尾

新虫 (初入文坛)

1:固定:0.5%冰乙酸和10%无水乙醇固定10min,然后漂洗两次,每次1min.
2:染色:0.2%硝酸银,0.5%冰乙酸和10%无水乙醇,震荡染色15min,然后漂洗两次,每次1min.
3:显影:3%NaOH和0.5甲醛,直到显影出现。
你试试这个方法,我用的这个还不错,但是我的聚丙烯胶跑的不好。
6楼2013-07-30 08:32:09
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 憨憨可爱多 at 2013-07-29 15:39:08
我的条带很弱,有什么改进的方法吗?...

条带弱说明蛋白丰度不够,只有增加load量了,Good luck!
互助互励,共奋共进!!
7楼2013-07-30 09:35:24
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