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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，银染法背景色颜色深
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)

[求助] 求助，银染法背景色颜色深

用的聚丙烯跑的DNA，显色的时候背景色极深
1、1%冰醋酸固定30min
2、漂洗3次，2min/次
3、2g硝酸银，3ml甲醛，2L水进行银染30分钟
4、漂洗5s
5、60g碳酸钠，3ml甲醛，400ul硫酸硫酸钠（10mg/ml），2L水，进行显影
6、终止显色
显色的时候胶版放下去5分钟左右整块就黑了，有点墨绿色的，看不到DNA条带，要拿出来对照白纸才能看见
求助，银染法背景色颜色深
DSC06985.JPG
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1楼 2013-07-11 19:22:41
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小鱼尾

新虫 (初入文坛)
你换种银染的方法
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2楼2013-07-27 17:39:49
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

染色后洗涤时间过短！
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互助互励，共奋共进！！
3楼2013-07-27 21:17:00
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小鱼尾 at 2013-07-27 17:39:49
你换种银染的方法

我换了种方法，背景成黄色的，染了很久才出DNA条带，别人的都是几分钟就能出带了，难道是我选扩体系有问题？
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4楼2013-07-29 15:38:31
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憨憨可爱多

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-27 21:17:00
染色后洗涤时间过短！

我的条带很弱，有什么改进的方法吗？
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5楼2013-07-29 15:39:08
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小鱼尾

新虫 (初入文坛)
1：固定：0.5%冰乙酸和10%无水乙醇固定10min,然后漂洗两次，每次1min.
2：染色：0.2%硝酸银，0.5%冰乙酸和10%无水乙醇，震荡染色15min,然后漂洗两次，每次1min.
3：显影：3%NaOH和0.5甲醛，直到显影出现。
你试试这个方法，我用的这个还不错，但是我的聚丙烯胶跑的不好。
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6楼2013-07-30 08:32:09
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 憨憨可爱多 at 2013-07-29 15:39:08
我的条带很弱，有什么改进的方法吗？...

条带弱说明蛋白丰度不够，只有增加load量了，Good luck！
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互助互励，共奋共进！！
7楼2013-07-30 09:35:24
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