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yiren12689

新虫 (初入文坛)

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[交流] 做过RED同源重组的大侠们请进！已有5人参与

做过RED同源重组的大侠们请进，PKD46拷贝数低，提出的量总是不高，怎么转也转不到我的目的菌迟缓爱德华菌里面去，我用的氯化钙法，也不知道是不是感受态的问题怎么办啊，做好长时间做不出来，不知道是什么问题啊？

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1楼 2013-07-11 10:01:09

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zy_696969

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

8楼: Originally posted by yiren12689 at 2014-03-06 19:09:13
也是电转吗？你们有没有用自杀性质粒做敲除的？...

嗯，产同源重组酶的质粒是pKD46，线性打靶片段是以pKD3为模板的。

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9楼2014-03-07 13:15:27

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zy_696969

金虫 (小有名气)

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木虫/panda: 金币+1, 鼓励交流，欢迎常来农林版 2014-03-06 15:26:04

1、试试电转化？
2、如果觉得感受态不好的话可以先做个阳性对照，或者直接买Takara之类公司的感受态。
3、我从其它实验室接过来的冻存是质粒pKD46保存在菌株BW25113中的。可以找下相关文献看有没有把pKD46转到你的那株菌里。
我最近也在吭哧吭哧地做RED同源重组，但是还没有实质进展，一起加油哇。↖(^ω^)↗

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2楼2013-10-14 15:09:01

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