24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 2 个 BioEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

» 猜你喜欢

写了一篇“相变储能技术在冷库中应用”的论文，论文内容以实验为主，投什么期刊合适？已经有5人回复
带资进组求博导收留已经有10人回复
最近几年招的学生写论文不引自己组发的文章已经有11人回复
需要合成515-64-0，50g，能接单的留言已经有3人回复
中科院杭州医学所招收博士生一名（生物分析化学、药物递送）已经有3人回复
临港实验室与上科大联培博士招生1名已经有8人回复
想换工作。大多数高校都是评职称时认可5年内在原单位取得的成果吗？已经有4人回复

1楼 2013-07-08 09:51:19

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

darkarrow

新虫 (初入文坛)

BioEPI: 1
应助: 7 (幼儿园)
金币: 73.8
红花: 1
帖子: 28
在线: 5.9小时
虫号: 2324932
注册: 2013-03-06
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-09 08:18:41
silicare: BioEPI+1 2013-07-09 09:48:16

一般来说这种问题都是和抗体得质量有关。看你第一张图，第二条泳道像是control，因为只有非特异性得那一条带，说明你得抗体对于那个蛋白有更强得affinity，这样得话，再相同孵育得条件下，非特异性蛋白结合得抗体更多，所以显色得时候就非常轻易得就出信号，而你得目的条带信号弱，需要相对比较长得时间。你可以尝试这样做，先短曝光，小心得把信号强得那段相应得膜剪掉，然后用更长得时间来曝光你得目的条带。western得影响因素很多，重复不出来也很正常。对于western样品得制备，最好得办法就是直接往细胞里加上样buffer，这样得重复性会好些。

赞一下

回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

浮帅古

6楼2013-07-09 03:33:07

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 11 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

BioEPI: 4
应助: 1662 (讲师)
金币: 8693.8
红花: 72
帖子: 3516
在线: 456小时
虫号: 1614001
注册: 2012-02-13
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-08 16:27:29
silicare: BioEPI+1 2013-07-09 09:47:57

我想先问一下你的阳性对照是什么，各个样品又是什么。你如何确定样品中的是非特异条带？抗体是自己做还是公司买的现成抗体？
做western有非特异条带也是很正常的，有时候的确是非特异带比目标蛋白带的信号强。蛋白样品的反复冻融对有些蛋白来说可能会降解比较严重，也可能导致western失败。

赞一下

回复此楼

2楼2013-07-08 14:02:18

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

浮帅古

铜虫 (小有名气)

BioEPI: 1
应助: 7 (幼儿园)
金币: 431.4
红花: 2
帖子: 168
在线: 57.3小时
虫号: 1210918
注册: 2011-02-23
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-08 14:02:18
我想先问一下你的阳性对照是什么，各个样品又是什么。你如何确定样品中的是非特异条带？抗体是自己做还是公司买的现成抗体？
做western有非特异条带也是很正常的，有时候的确是非特异带比目标蛋白带的信号强。蛋白 ...

我的实验是用慢病毒制备转基因鸡，阳性对照是细胞实验时用病毒感染细胞后提取的蛋白，后来在鸡的组织蛋白样品中杂到与细胞实验相同的条带，所以认定这段时间杂出的下面那排很粗的是非特异性条带。
这段时间WB样品用的是从鸡蛋里提的蛋白，我分别用PEG6000和氯仿两种方法提取，PEG法始终未杂出目的条带，氯仿法提的就杂出一次如图的条带。GFP抗体是买的博尔迈公司的，杂浓度很低的标准品都没问题的。
蛋白样品反复冻融确实会降解，但是我只冻融两次应该不会完全降解啊，而且样品溶解都是插在冰盒里的。我又重新提蛋白的还没杂出来，过一个月就该汇报工作了，很焦急。