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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-08 16:27:29
silicare: BioEPI+1 2013-07-09 09:47:57
我想先问一下你的阳性对照是什么,各个样品又是什么。你如何确定样品中的是非特异条带?抗体是自己做还是公司买的现成抗体?
做western有非特异条带也是很正常的,有时候的确是非特异带比目标蛋白带的信号强。蛋白样品的反复冻融对有些蛋白来说可能会降解比较严重,也可能导致western失败。
2楼2013-07-08 14:02:18
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darkarrow

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-09 08:18:41
silicare: BioEPI+1 2013-07-09 09:48:16
一般来说这种问题都是和抗体得质量有关。看你第一张图,第二条泳道像是control,因为只有非特异性得那一条带,说明你得抗体对于那个蛋白有更强得affinity,这样得话,再相同孵育得条件下,非特异性蛋白结合得抗体更多,所以显色得时候就非常轻易得就出信号,而你得目的条带信号弱,需要相对比较长得时间。你可以尝试这样做,先短曝光,小心得把信号强得那段相应得膜剪掉,然后用更长得时间来曝光你得目的条带。western得影响因素很多,重复不出来也很正常。对于western样品得制备,最好得办法就是直接往细胞里加上样buffer,这样得重复性会好些。

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6楼2013-07-09 03:33:07
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