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后悔无期金虫 (小有名气)
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RACE 技术
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1、模板确定5`和3`后，5RACE的引物设计是与模板序列反向互补， 3RACE与模板序列相同? 2、TA克隆，平板或者菌液PCR的假阳性很高，可能存在啥原因呢？ |
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后悔无期
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5楼2013-07-02 08:16:15
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后悔无期: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-07-02 08:07:33
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第一个问题 3‘RACE是为了得到未知cDNA的下游部分，所以3‘RACE引物是“已知序列的一部分”，目的是于互补序列结合，在已知序列上寻找合适的片段就可以了。 而5’RACE引物虽然也是“已知序列的一部分”，但是由于延伸方向必须是5“－－3”，所以其延伸方向和已知序列相反，目的是于自身已知序列结合，也就是说，可以在已知序列上寻找合适的片段做引物，但是写出来的是其“反向互补的序列”。 附件是我以前搜集的资料，讲得比较详细，你可以下下来看看 |
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2013-07-01 17:22:22, 25 K
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后悔无期2楼2013-07-01 17:22:38
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3楼2013-07-02 08:06:58
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4楼2013-07-02 08:12:12