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后悔无期

金虫 (小有名气)

[求助] RACE 技术

1、模板确定5`和3`后，5RACE的引物设计是与模板序列反向互补， 3RACE与模板序列相同?

2、TA克隆，平板或者菌液PCR的假阳性很高，可能存在啥原因呢？
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别回忆，因为回不去。把眼泪留给最疼你的人，把微笑留给伤你最深的人。
1楼 2013-07-01 15:11:07
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-07-01 18:48:47
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 很到位的讲解啊 2013-07-01 18:48:57
后悔无期: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-07-02 08:07:33
第一个问题
3‘RACE是为了得到未知cDNA的下游部分，所以3‘RACE引物是“已知序列的一部分”，目的是于互补序列结合，在已知序列上寻找合适的片段就可以了。
而5’RACE引物虽然也是“已知序列的一部分”，但是由于延伸方向必须是5“－－3”，所以其延伸方向和已知序列相反，目的是于自身已知序列结合，也就是说，可以在已知序列上寻找合适的片段做引物，但是写出来的是其“反向互补的序列”。

附件是我以前搜集的资料，讲得比较详细，你可以下下来看看
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  • 附件 1 : race引物.doc
    • 2013-07-01 17:22:22, 25 K

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

后悔无期
我们的过去，成就了如今的我们，无需悔恨
2楼2013-07-01 17:22:38
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后悔无期

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 涌动的泉 at 2013-07-01 17:22:38
第一个问题
3‘RACE是为了得到未知cDNA的下游部分，所以3‘RACE引物是“已知序列的一部分”，目的是于互补序列结合，在已知序列上寻找合适的片段就可以了。
而5’RACE引物虽然也是“已知序列的一部分”，但是由于 ...

THANKS！
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别回忆，因为回不去。把眼泪留给最疼你的人，把微笑留给伤你最深的人。
3楼2013-07-02 08:06:58
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后悔无期

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 涌动的泉 at 2013-07-01 17:22:38
第一个问题
3‘RACE是为了得到未知cDNA的下游部分，所以3‘RACE引物是“已知序列的一部分”，目的是于互补序列结合，在已知序列上寻找合适的片段就可以了。
而5’RACE引物虽然也是“已知序列的一部分”，但是由于 ...

比如说：在模板上找到的5RACE引物序列是5~ATGC..3:  那写出来的引物序列应该是5~GCAT...3   ?
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4楼2013-07-02 08:12:12
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后悔无期

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 涌动的泉 at 2013-07-01 17:22:38
第一个问题
3‘RACE是为了得到未知cDNA的下游部分，所以3‘RACE引物是“已知序列的一部分”，目的是于互补序列结合，在已知序列上寻找合适的片段就可以了。
而5’RACE引物虽然也是“已知序列的一部分”，但是由于 ...

还是：5~CGTA...3 呢  ?
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别回忆，因为回不去。把眼泪留给最疼你的人，把微笑留给伤你最深的人。
5楼2013-07-02 08:16:15
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后悔无期

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 涌动的泉 at 2013-07-01 17:22:38
第一个问题
3‘RACE是为了得到未知cDNA的下游部分，所以3‘RACE引物是“已知序列的一部分”，目的是于互补序列结合，在已知序列上寻找合适的片段就可以了。
而5’RACE引物虽然也是“已知序列的一部分”，但是由于 ...

看了你的附加文件，就懂了！谢谢！
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别回忆，因为回不去。把眼泪留给最疼你的人，把微笑留给伤你最深的人。
6楼2013-07-02 08:25:06
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涌动的泉

铜虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 后悔无期 at 2013-07-02 08:06:58
THANKS！...

7楼2013-07-02 08:49:54
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