3楼: Originally posted by 透明的玻璃杯 at 2013-06-30 20:37:12
亮的是2K吗？
作者告诉我他们用50-55退火温度都可以,反应条件是退火60度. 这一点不清楚，你试过50没有？
引物0.2ul, 有没有试过多加点？
要不再另外找家公司合成新的引物试试，反正也不贵。

我能想到的就是这 ...

8楼: Originally posted by ivyvampire at 2013-07-01 11:20:13
这不是引物二聚体，也不是非特异扩增，背景有点高，你模板和引物分别跑过电泳没，可能模板没提纯

10楼: Originally posted by zou43118217 at 2013-07-01 12:14:22
另外引物TM值太低了，要是用60℃退火，可以把引物TM值设到60~65左右...

8楼: Originally posted by ivyvampire at 2013-07-01 11:20:13
这不是引物二聚体，也不是非特异扩增，背景有点高，你模板和引物分别跑过电泳没，可能模板没提纯

9楼: Originally posted by zou43118217 at 2013-07-01 12:12:12
虽然pfu酶扩增速度快，但建议还是给延伸时间加长，用utrapfu 10分钟可以扩增从1k到10k所有条带

12楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-07-01 13:30:24
模板是别人寄给我的，到了之后我就跑了电泳，回收回来的。不知道怎么破了...

16楼: Originally posted by ivyvampire at 2013-07-01 14:41:44
那可能回收得不好，回收后乙醇没挥发完全也会引起这种现象。这肯定是背景太深了，又不是扩不出来，跟模板，酶，引物质量关系比较大，你回收后跑电泳没，可以看看条带怎么样？...

15楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-07-01 13:43:14
不是说时间久了 为非特异性扩增吗？...

9楼: Originally posted by zou43118217 at 2013-07-01 12:12:12
虽然pfu酶扩增速度快，但建议还是给延伸时间加长，用utrapfu 10分钟可以扩增从1k到10k所有条带