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m_marion

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【答案】应助回帖

★ ★
liyongliangx: 金币+2, ★★★很有帮助, 让我知道了以前不知道的一些技巧 2013-07-01 18:16:19

引用回帖:

15楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-07-01 13:43:14
不是说时间久了为非特异性扩增吗？...

不同的酶不一样，应该严格按照说明书的指导做，不要随便改延伸时间，包括退火时间，举例来说：Takara PrimerSTAR的退火时间是5~15s，要是用TaqE常用的30s，经常会出现严重的弥散条带

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21楼2013-07-01 17:03:24

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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

19楼: Originally posted by zou43118217 at 2013-07-01 16:57:52
特异性扩增的最主要原因还是引物的特异性不够，就是太短，使得TM值越高，特异性越高，换引物吧，从来没用过TM值这么低的引物，我一般设TM为68℃的引物，而后根据酶选择不同选取适合合适的退火温度，像UtraPF一般就 ...

我也没有用过这样的引物，当初考虑这是别人已经发表的paper里的，就没有再多想，就直接用了

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22楼2013-07-01 18:17:31

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