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liyongliangx铜虫 (小有名气)
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PCR的问题，痛苦！
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做了一个PCR ，结果如图：10ul的体系，酶用的Phusion mix,加样5ul ，引物 20uM 0.2ul，模板1ng/ul 0.2ul,ddH2O补至10 ul。 反应条件是退火60度，延伸72 1min。 要扩增的片段大小为2000bp。 引物为别人文献里报道的， 用了PRIMER 5.0 分析结果也在附件中，我问过了原作者，他告诉我他们扩增的没有问题。但是不知道我这哪里出了问题。作者告诉我他们用50-55退火温度都可以 ，但我做了后全是弥散带，做了梯度后发现最好就是这样了，再高的温度就没有带了。。。 希望大家帮我分析分析。 先进的同学帮助下后进的同学。  1.png  85000F2C9B404366A35CD7F31F7F1EC9.jpg [ Last edited by 1949stone on 2013-7-1 at 07:46 ] |
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