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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 很奇怪的酶切连接问题
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
33ggdf: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-07-07 10:56:33
1. 建议你重新合成测序的印物，位置在你的序列上游30~50bp
2. 你用的是什么酶联接呢？而且做完ligation后转化的细胞是哪一种e.coli?
3. 考虑其他的在plasmid上的位点切一下
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11楼2013-07-04 17:01:04
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ws2yzs

新虫 (初入文坛)
个人比较倾向于你的位点甲基化了。
你通过扩增引物测序的结果，可以阅读出全部的基因的。反向的测序可以阅读5‘端，正向测序看3’端.测序只是引物后面几个碱基看不清楚。 另外一段的碱基可以看的
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12楼2013-07-04 18:17:23
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-07-04 10:32:23
未解决，个人觉得很可能没连上，你现在是什么情况...

我觉得可能是没切开的问题。。。你用的什么限制性内切酶？
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keepon
13楼2013-07-05 08:14:37
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33ggdf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by lwiaanngg at 2013-07-04 17:01:04
1. 建议你重新合成测序的印物，位置在你的序列上游30~50bp
2. 你用的是什么酶联接呢？而且做完ligation后转化的细胞是哪一种e.coli?
3. 考虑其他的在plasmid上的位点切一下

用的T4连接酶，10×buffer。转化的大肠杆菌
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14楼2013-07-07 10:56:19
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