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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 多糖的除蛋白问题
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chong//虫

铜虫 (小有名气)

[求助] 多糖的除蛋白问题

大家好： 想问大家一个问题，我在对水提的虫草多糖进行除蛋白时，除蛋白前紫外检测的时候200-400nm之间没有峰吸收 ，曲线很平稳，只是快要到200即接近纵轴的时候曲线急剧的上升。之后我又用胰蛋白酶处理了三次，离心时有少量的白色沉淀，然后我又用savege法处理了4次，此时中间层看不到有白色絮状物，我认为蛋白除干净了，可紫外的时候曲线形状和除蛋白前一样，没有变化，只是在260nm和280nm处的吸光度变大了。之前我的材料用80%的乙醇回流提取过，可是我查了80%的乙醇只能除去一些色素、小分子的化合物、单糖和一些低聚糖等，不会除去蛋白的呀，处理前和处理后分别茚三酮颜色反应也不明显，要说没有蛋白不可能的呀，那我savege法处理的时候中间那絮状物是什么呀？是不是我操作错了还是？希望有做过的同仁们能给指点一下，麻烦大家了！
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1楼 2013-06-20 10:59:47
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琥珀天千

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by chong//虫 at 2013-06-21 16:46:51
非常谢谢，我把多糖溶解在水里，我没有木瓜蛋白酶，用的是胰蛋白酶，它的水解条件好像是PH=7.8-8.1，我没有调节PH，直接在50℃水浴4小时，酶法我处理了3次，然后4次SEVAG法处理，就看不到变性蛋白了，而且我的溶液 ...

你好，请问你当时用的胰蛋白酶浓度及添加量是多少啊
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9楼2017-05-14 12:30:31
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chong//虫

铜虫 (小有名气)
不好意思，前面打错了，除蛋白前茚三酮反应紫色很明显，经胰蛋白酶，savege法处理后，颜色反应呈很浅的紫色，就是有点灰灰的感觉，那为什么紫外看不出来变化呢？我想象的是除蛋白前有峰吸收，除蛋白后曲线变平稳，可是曲线都是平稳的，怎么回事？
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2楼2013-06-20 11:11:53
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拜仁主义

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些蛋白是和多糖结合在一起的糖蛋白，很难除去的，我一般都用1%的木瓜蛋白酶50摄氏度水浴一小时，然后用SEVAG法脱蛋白，在摇床上剧烈震摇20分钟左右，要这么弄个10几次才算完全脱干净蛋白，之间剧烈震摇还造成了乳化，损失了不少多糖，痛苦......感觉楼主好像脱的有点太轻松了点，4次个人觉的是不够的，即使中间已经看不到变性蛋白。
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chong//虫
天然药物药理。。。。。。。
3楼2013-06-20 20:40:44
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蓝龙教主

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
除蛋白的过程会损失40%左右的粗提物，仔细想想，植物来源的多糖里面是不可能含有这么多的蛋白的。当蛋白去除的时候，我以前采用了蛋白酶与正丁醇，氯仿合用的办法清除。
多糖的分离纯化是个缓慢的过程，但是个人认为，可能糖蛋白还是有一定活性的，糖蛋白应该还保留有蛋白的活性，那么可以试试盐析，或者分离蛋白的方法，这些东西我没有试过，但是我觉得应该具有可行性。
在盐溶液中，多糖的溶解度还是比较好的
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chong//虫
4楼2013-06-20 23:35:55
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