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晨青小虫

铜虫 (初入文坛)

[求助] ELISA检测猪肉中的酪胺,怎样充分除脂?

我是做ELISA的,主要检测新鲜肉及肉制品中的酪胺,目前需要做实际样品了。发现基质影响很难消除,(我是把1g肉用3ml甲醇做提取液,漩涡振荡10分钟,重复提两次。合并上清液,正己烷除脂多次,弃去上层正己烷层,但是氮吹后用10mlPBS复溶后发现混浊,像是有脂肪,离心取上清,将样品稀释液稀释到50倍,加入0.5%BSA掩蔽剂,作板,发现样品稀释液的control才0.6,不能与标曲重合。)
    用甲醇做提取液是考虑到标品的溶解性问题,因为酪胺不溶于氯仿、不溶于乙酸乙酯等溶剂。而样品稀释50倍也是达到稀释上限了,再稀释的话检测实际样品的灵敏度就很低了。
    正己烷、乙酸乙酯、石油醚等有机溶剂哪个除脂效果好?有哪位高人能指导我一下除脂的好方法,以消除基质影响,不胜感激!!!
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zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by zybpxy at 2013-06-17 19:56:42
氯仿甲醇混合液除脂,然后加水,稍加水,酪胺在上层甲醇水中。

补充一下,脂肪在氯仿中
走的太远,别忘了为何出发
3楼2013-06-17 19:57:45
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zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
氯仿甲醇混合液除脂,然后加水,稍加水,酪胺在上层甲醇水中。
走的太远,别忘了为何出发
2楼2013-06-17 19:56:42
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晨青小虫

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zybpxy at 2013-06-17 19:57:45
补充一下,脂肪在氯仿中...

很感谢您的回复~~~
我想问一下,脂肪是更易溶于甲醇呢,还是氯仿呢?氯仿甲醇的比例有要求吗?(甲醇和正己烷不互溶,而氯仿和甲醇互溶,氯仿比正己烷除脂更好吗?)
4楼2013-06-20 10:13:50
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zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 晨青小虫 at 2013-06-20 10:13:50
很感谢您的回复~~~
我想问一下,脂肪是更易溶于甲醇呢,还是氯仿呢?氯仿甲醇的比例有要求吗?(甲醇和正己烷不互溶,而氯仿和甲醇互溶,氯仿比正己烷除脂更好吗?)...

一般采用氯仿:甲醇2:1

因为要形成氯仿,甲醇和水的体系,使脂肪充分溶解于氯仿中
走的太远,别忘了为何出发
5楼2013-06-20 11:29:59
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