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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 营养安全 » ELISA检测猪肉中的酪胺，怎样充分除脂？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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晨青小虫

铜虫 (初入文坛)

[求助] ELISA检测猪肉中的酪胺，怎样充分除脂？

我是做ELISA的，主要检测新鲜肉及肉制品中的酪胺，目前需要做实际样品了。发现基质影响很难消除，（我是把1g肉用3ml甲醇做提取液，漩涡振荡10分钟，重复提两次。合并上清液，正己烷除脂多次，弃去上层正己烷层，但是氮吹后用10mlPBS复溶后发现混浊，像是有脂肪，离心取上清，将样品稀释液稀释到50倍，加入0.5%BSA掩蔽剂，作板，发现样品稀释液的control才0.6，不能与标曲重合。）
    用甲醇做提取液是考虑到标品的溶解性问题，因为酪胺不溶于氯仿、不溶于乙酸乙酯等溶剂。而样品稀释50倍也是达到稀释上限了，再稀释的话检测实际样品的灵敏度就很低了。
    正己烷、乙酸乙酯、石油醚等有机溶剂哪个除脂效果好？有哪位高人能指导我一下除脂的好方法，以消除基质影响，不胜感激！！！
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1楼 2013-06-17 16:44:04
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zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
氯仿甲醇混合液除脂，然后加水，稍加水，酪胺在上层甲醇水中。
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走的太远，别忘了为何出发
2楼2013-06-17 19:56:42
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zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by zybpxy at 2013-06-17 19:56:42
氯仿甲醇混合液除脂，然后加水，稍加水，酪胺在上层甲醇水中。

补充一下，脂肪在氯仿中
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走的太远，别忘了为何出发
3楼2013-06-17 19:57:45
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晨青小虫

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zybpxy at 2013-06-17 19:57:45
补充一下，脂肪在氯仿中...

很感谢您的回复~~~
我想问一下，脂肪是更易溶于甲醇呢，还是氯仿呢？氯仿甲醇的比例有要求吗？（甲醇和正己烷不互溶，而氯仿和甲醇互溶，氯仿比正己烷除脂更好吗？）
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4楼2013-06-20 10:13:50
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zybpxy

铁杆木虫 (著名写手)

致斋大人

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 晨青小虫 at 2013-06-20 10:13:50
很感谢您的回复~~~
我想问一下，脂肪是更易溶于甲醇呢，还是氯仿呢？氯仿甲醇的比例有要求吗？（甲醇和正己烷不互溶，而氯仿和甲醇互溶，氯仿比正己烷除脂更好吗？）...

一般采用氯仿：甲醇2：1

因为要形成氯仿，甲醇和水的体系，使脂肪充分溶解于氯仿中
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走的太远，别忘了为何出发
5楼2013-06-20 11:29:59
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wangyan048

新虫 (初入文坛)
你好 请问你还在做酪胺的elisa吗？
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6楼2014-05-05 10:32:23
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