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ELISA检测猪肉中的酪胺,怎样充分除脂?
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我是做ELISA的,主要检测新鲜肉及肉制品中的酪胺,目前需要做实际样品了。发现基质影响很难消除,(我是把1g肉用3ml甲醇做提取液,漩涡振荡10分钟,重复提两次。合并上清液,正己烷除脂多次,弃去上层正己烷层,但是氮吹后用10mlPBS复溶后发现混浊,像是有脂肪,离心取上清,将样品稀释液稀释到50倍,加入0.5%BSA掩蔽剂,作板,发现样品稀释液的control才0.6,不能与标曲重合。) 用甲醇做提取液是考虑到标品的溶解性问题,因为酪胺不溶于氯仿、不溶于乙酸乙酯等溶剂。而样品稀释50倍也是达到稀释上限了,再稀释的话检测实际样品的灵敏度就很低了。 正己烷、乙酸乙酯、石油醚等有机溶剂哪个除脂效果好?有哪位高人能指导我一下除脂的好方法,以消除基质影响,不胜感激!!! |
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