应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我的蛋白序列鉴定都是正确的，可是为什么就是不表达，是为什么呢？附SDS-PAGE图
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
523/6返回列表上一页123456下一页
查看: 5749  |  回复: 51
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sherrysure

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
19楼: Originally posted by aoda123 at 2013-06-08 10:49:46
我做的也是跨膜蛋白，之前用BL21和Rosetta里面都不表达。不然你就优化你的诱导条件...

好的，会参考你的意见，我也想办法要要看这个菌株做一批感受态试试，谢谢你！
赞一下 回复此楼
21楼2013-06-08 11:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

EthanXJY

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sherrysure(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-05 08:25:19
请看下序列中是否含有大肠杆菌稀有密码子~假如有，使用transetta菌株~
赞一下 回复此楼
22楼2013-06-08 11:41:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuding6

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
密码子优化一下，或纯化富集一下再跑电泳。问题总会解决的。
赞一下 回复此楼
23楼2013-06-08 13:39:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by sherrysure at 2013-06-08 10:33:38
你的意思是先大量培养，然后纯化出来看看是吗？我正打算这样做。但是有一个问题，就是如果这个蛋白真的是表达量较少，那么我后面如果要用来免疫的话会不会浓度不够？...

免疫只是个检测手段，完全有可能检测不出来的。所以我建议是能富集的情况下，先富集再检测
赞一下 回复此楼
24楼2013-06-08 14:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xjtu0025

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
sherrysure(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-05 08:25:30
要是包涵体,你就长时间低温,然后破碎吧.不是说减少蛋白表达,是减少形成包涵体..或者你就试试28度220转,6个小时,然后拿去破碎跑沉淀和上清,做western吧..
赞一下 回复此楼
25楼2013-06-08 16:33:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoweiwei121

禁虫

这潭水蓝的深邃

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by sherrysure at 2013-06-08 10:32:26
我打算先大量培养，纯化出来看看，是否可行呢？...

是可行的，但是你还要有一步就是优化纯化条件，不然有时候也是看不到纯化条带
我在昆虫细胞中表达蛋白，刚开始也是检测不到，通过纯化之后，终于看到了
赞一下 回复此楼
26楼2013-06-09 01:39:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoweiwei121

新虫

这潭水蓝的深邃

【答案】应助回帖

引用回帖:
20楼: Originally posted by sherrysure at 2013-06-08 11:05:38
这个蛋白是以包涵体存在的。我查了一下，长时间低温诱导的作用是减少包涵体的形成。那么我的蛋白表达量是不是也会减少呢？...

个人认为吧，你还是先不要考虑这么多如温度影响表达量啊，以后蛋白量够不够啊之类的问题，现在先考虑的是如何能看到蛋白表达，只有蛋白表达了，才能说以后的话
赞一下(1人) 回复此楼
27楼2013-06-09 01:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherrysure

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
25楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-06-08 16:33:52
要是包涵体,你就长时间低温,然后破碎吧.不是说减少蛋白表达,是减少形成包涵体..或者你就试试28度220转,6个小时,然后拿去破碎跑沉淀和上清,做western吧..

也就是说我的蛋白还是会表达的，就是不形成包涵体了是吗？低温过夜一般是怎样的呢？16度12h？
赞一下 回复此楼
28楼2013-06-11 17:03:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherrysure

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
26楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2013-06-09 01:39:10
是可行的，但是你还要有一步就是优化纯化条件，不然有时候也是看不到纯化条带
我在昆虫细胞中表达蛋白，刚开始也是检测不到，通过纯化之后，终于看到了...

还想请问一下纯化条件应该如何优化呢？有哪些基本参数需要注意的地方吗？目前还没有做过纯化，但是看师兄做过，还是求指点一下细节~谢谢！！
赞一下 回复此楼
29楼2013-06-11 17:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoweiwei121

禁虫

这潭水蓝的深邃
引用回帖:
29楼: Originally posted by sherrysure at 2013-06-11 17:07:32
还想请问一下纯化条件应该如何优化呢？有哪些基本参数需要注意的地方吗？目前还没有做过纯化，但是看师兄做过，还是求指点一下细节~谢谢！！...

这个我就说不好了，不同的标签蛋白纯化也不一样，我做的是GST标签纯化的
你最好问一下你们做过的师兄吧
赞一下 回复此楼
30楼2013-06-12 02:48:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sherrysure 的主题更新
523/6返回列表上一页123456下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +17 新时代材料 2026-03-27 19/950 2026-04-01 12:11 by -迷了路啊路
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +10 美味可乐鸡翅 2026-03-26 12/600 2026-04-01 11:17 by syh9288
[考研] 085410人工智能 初试316分 求调剂 +3 残星拂曙 2026-03-31 3/150 2026-04-01 11:09 by 小熊raider
[考研] 070300求调剂306分 +5 26要上岸 2026-03-27 5/250 2026-04-01 11:09 by oooqiao
[考研] 土木304求调剂 +5 顶级擦擦 2026-03-31 5/250 2026-04-01 08:15 by fdcxdystjk￥
[考研] 一志愿北京科技大学材料学硕328分求调剂 +4 1段时间 2026-03-31 5/250 2026-03-31 19:56 by wxiongid
[考研] 0856求调剂 +9 楒桉 2026-03-28 9/450 2026-03-31 19:06 by 暮泽12
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +11 萝卜炖青菜 2026-03-28 12/600 2026-03-31 17:54 by xhai2011
[考研] 285求调剂 +6 AZMK 2026-03-30 11/550 2026-03-31 17:33 by AZMK
[考研] 311求调剂 +9 蓝月亮亮 2026-03-30 9/450 2026-03-31 16:32 by yedezhan
[考研] 367求调剂 +7 芋泥啵啵… 2026-03-28 7/350 2026-03-31 14:55 by 不吃魚的貓
[考研] 本科211生物医学工程085409求调剂339分 +7 里子木yy 2026-03-29 7/350 2026-03-31 14:35 by fmesaito
[考研] 08工科求调剂286 +5 tgs_001 2026-03-28 5/250 2026-03-31 08:18 by 一只好果子?
[考研] 一志愿食品科学与工程083200求调剂 +4 XQTJZ 2026-03-30 4/200 2026-03-31 04:10 by fmesaito
[考研] 343求调剂085601 +3 要努力学习x 2026-03-29 3/150 2026-03-29 18:35 by wxiongid
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 085602 化工专硕 338分 求调剂 +12 路痴小琪 2026-03-27 12/600 2026-03-28 15:41 by L135790
[考研] 药学105500求调剂 +3 Ssun。。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭