24小时热门版块排行榜    

查看: 6283  |  回复: 51

sherrysure

银虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by aoda123 at 2013-06-08 10:49:46
我做的也是跨膜蛋白,之前用BL21和Rosetta里面都不表达。不然你就优化你的诱导条件...

好的,会参考你的意见,我也想办法要要看这个菌株做一批感受态试试,谢谢你!
21楼2013-06-08 11:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

EthanXJY

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
sherrysure(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-05 08:25:19
请看下序列中是否含有大肠杆菌稀有密码子~假如有,使用transetta菌株~
22楼2013-06-08 11:41:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuding6

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
密码子优化一下,或纯化富集一下再跑电泳。问题总会解决的。
23楼2013-06-08 13:39:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by sherrysure at 2013-06-08 10:33:38
你的意思是先大量培养,然后纯化出来看看是吗?我正打算这样做。但是有一个问题,就是如果这个蛋白真的是表达量较少,那么我后面如果要用来免疫的话会不会浓度不够?...

免疫只是个检测手段,完全有可能检测不出来的。所以我建议是能富集的情况下,先富集再检测
24楼2013-06-08 14:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xjtu0025

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


sherrysure(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-05 08:25:30
要是包涵体,你就长时间低温,然后破碎吧.不是说减少蛋白表达,是减少形成包涵体..或者你就试试28度220转,6个小时,然后拿去破碎跑沉淀和上清,做western吧..
25楼2013-06-08 16:33:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by sherrysure at 2013-06-08 10:32:26
我打算先大量培养,纯化出来看看,是否可行呢?...

是可行的,但是你还要有一步就是优化纯化条件,不然有时候也是看不到纯化条带
我在昆虫细胞中表达蛋白,刚开始也是检测不到,通过纯化之后,终于看到了
26楼2013-06-09 01:39:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
20楼: Originally posted by sherrysure at 2013-06-08 11:05:38
这个蛋白是以包涵体存在的。我查了一下,长时间低温诱导的作用是减少包涵体的形成。那么我的蛋白表达量是不是也会减少呢?...

个人认为吧,你还是先不要考虑这么多如温度影响表达量啊,以后蛋白量够不够啊之类的问题,现在先考虑的是如何能看到蛋白表达,只有蛋白表达了,才能说以后的话

27楼2013-06-09 01:42:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherrysure

银虫 (小有名气)

引用回帖:
25楼: Originally posted by xjtu0025 at 2013-06-08 16:33:52
要是包涵体,你就长时间低温,然后破碎吧.不是说减少蛋白表达,是减少形成包涵体..或者你就试试28度220转,6个小时,然后拿去破碎跑沉淀和上清,做western吧..

也就是说我的蛋白还是会表达的,就是不形成包涵体了是吗?低温过夜一般是怎样的呢?16度12h?
28楼2013-06-11 17:03:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherrysure

银虫 (小有名气)

引用回帖:
26楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2013-06-09 01:39:10
是可行的,但是你还要有一步就是优化纯化条件,不然有时候也是看不到纯化条带
我在昆虫细胞中表达蛋白,刚开始也是检测不到,通过纯化之后,终于看到了...

还想请问一下纯化条件应该如何优化呢?有哪些基本参数需要注意的地方吗?目前还没有做过纯化,但是看师兄做过,还是求指点一下细节~谢谢!!
29楼2013-06-11 17:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

引用回帖:
29楼: Originally posted by sherrysure at 2013-06-11 17:07:32
还想请问一下纯化条件应该如何优化呢?有哪些基本参数需要注意的地方吗?目前还没有做过纯化,但是看师兄做过,还是求指点一下细节~谢谢!!...

这个我就说不好了,不同的标签蛋白纯化也不一样,我做的是GST标签纯化的
你最好问一下你们做过的师兄吧
30楼2013-06-12 02:48:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sherrysure 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 言之凿凿,8月21号(明天)放榜 +12 医学老男孩 2026-08-20 14/700 2026-08-20 10:53 by ran2233
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 21/1050 2026-08-20 10:37 by Vivilian
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 125/6250 2026-08-20 09:02 by 医学老男孩
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见