| 查看: 6467 | 回复: 51 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
sherrysure银虫 (小有名气)
|
[求助]
我的蛋白序列鉴定都是正确的，可是为什么就是不表达，是为什么呢？附SDS-PAGE图
|
|
|
这3个月一直在做蛋白表达， 但是一直没有成功。 我是这样做的： 把扩增出来的目的条带连接到pMD18TSimple，转化到Top10； 选择PCR与测序鉴定结果都正确的阳性菌液，提质粒，酶切，回收目的条带； 酶切后目的条带连接到pET30a载体，转化到Rosetta； 菌液PCR和测序鉴定结果正确的阳性菌液扩大培养，在0、2、4、6、8h取样做SDS-PAGE； 得到的结果就是没有结果  期间也试过以下表达载体：pET28b、pET30a、pET32a 选择的酶切位点是BamHI、XhoI，都对应载体图谱数过，不会存在移码的问题。 分别也都尝试过感受态：BL21、Rosetta 但是结果都是不表达，跑出来与上面类似的图 迫切寻求帮助，请求高手指导~~感激不尽！  page.jpg [ Last edited by sherrysure on 2013-6-6 at 14:47 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有128人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
sherrysure
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1117.5
- 散金: 8
- 红花: 2
- 帖子: 121
- 在线: 82.4小时
- 虫号: 1285648
- 注册: 2011-05-04
- 专业: 兽医寄生虫学
20楼2013-06-08 11:05:38
linxt2005
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 1250.3
- 红花: 2
- 帖子: 185
- 在线: 141.1小时
- 虫号: 2062910
- 注册: 2012-10-15
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2013-06-06 16:48:10
sherrysure
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1117.5
- 散金: 8
- 红花: 2
- 帖子: 121
- 在线: 82.4小时
- 虫号: 1285648
- 注册: 2011-05-04
- 专业: 兽医寄生虫学
3楼2013-06-06 18:20:27
xiaoweiwei121
荣誉版主 (文坛精英)
这潭水蓝的深邃
- MolEPI: 5
- 应助: 18 (小学生)
- 贵宾: 39.097
- 金币: 106416
- 散金: 2773
- 红花: 197
- 沙发: 109
- 帖子: 35580
- 在线: 2157.8小时
- 虫号: 426591
- 注册: 2007-07-28
- 性别: MM
- 专业: 蛋白质组学
- 管辖: 虫友互识
4楼2013-06-06 23:59:39
