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sherrysure

银虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by aoda123 at 2013-06-08 10:49:46
我做的也是跨膜蛋白,之前用BL21和Rosetta里面都不表达。不然你就优化你的诱导条件...

之前说你也是做的跨膜蛋白,最后表达了吗?
41楼2013-07-04 08:59:34
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
40楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-04 08:56:52
我想尝试做WB,但是大量扩繁 做完蛋白纯化 跑PAGE的时候居然什么条带也没有。。是不是真的没有表达?好难过。。。...

你应该去做WB,如果再没有,那就是没有表达了。就要找原因了
42楼2013-07-04 09:21:27
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aoda123

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
41楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-04 02:59:34
之前说你也是做的跨膜蛋白,最后表达了吗?...

表达出来了,但是表达量很低
身体健康,工作顺利
43楼2013-07-04 09:46:47
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sherrysure

银虫 (小有名气)

引用回帖:
43楼: Originally posted by aoda123 at 2013-07-04 09:46:47
表达出来了,但是表达量很低...

是通过优化诱导表达的条件就发现表达了的吗?还是WB验证的呢?在WB之前是不是要大量富集纯化出来呢?谢谢!
44楼2013-07-04 10:51:36
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sherrysure

银虫 (小有名气)

引用回帖:
42楼: Originally posted by dshlove at 2013-07-04 09:21:27
你应该去做WB,如果再没有,那就是没有表达了。就要找原因了...

在WB之前不是一般要通过富集纯化的吗?还是说你的意思是直接用诱导4h的菌液PAGE后直接做WB呢?
45楼2013-07-04 10:52:42
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aoda123

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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45楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-04 04:52:42
在WB之前不是一般要通过富集纯化的吗?还是说你的意思是直接用诱导4h的菌液PAGE后直接做WB呢?...

我直接做的WB,没有纯化。本身表达很低,纯化后没有多少
身体健康,工作顺利
46楼2013-07-04 11:20:13
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
45楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-04 10:52:42
在WB之前不是一般要通过富集纯化的吗?还是说你的意思是直接用诱导4h的菌液PAGE后直接做WB呢?...

如果是你这种情况,我的建议是,第一步富集一下就去做WB。
47楼2013-07-04 12:41:45
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

引用回帖:
40楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-04 08:56:52
我想尝试做WB,但是大量扩繁 做完蛋白纯化 跑PAGE的时候居然什么条带也没有。。是不是真的没有表达?好难过。。。...

我做western的没有纯化,直接做的
你可以尝试一下
48楼2013-07-05 02:01:36
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sherrysure

银虫 (小有名气)

引用回帖:
47楼: Originally posted by dshlove at 2013-07-04 12:41:45
如果是你这种情况,我的建议是,第一步富集一下就去做WB。...

是不是就是这样:比如说接种到300ml的培养基,摇3h,然后加IPTG诱导4h,直接取样page,之后WB。如果有表达的话就可以看到??
49楼2013-07-05 18:06:58
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
49楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-05 18:06:58
是不是就是这样:比如说接种到300ml的培养基,摇3h,然后加IPTG诱导4h,直接取样page,之后WB。如果有表达的话就可以看到??...

这样是可以的,但是如果你的表达量很少的话,就不好说了,可能会看不清。
如果你表达量很少(在page上看不到明显条带),如果胞内表达的话,收细胞,破碎之后富集一下,再做WB。
50楼2013-07-06 19:59:37
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