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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我的蛋白序列鉴定都是正确的，可是为什么就是不表达，是为什么呢？附SDS-PAGE图
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sherrysure

银虫 (小有名气)
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19楼: Originally posted by aoda123 at 2013-06-08 10:49:46
我做的也是跨膜蛋白，之前用BL21和Rosetta里面都不表达。不然你就优化你的诱导条件...

之前说你也是做的跨膜蛋白，最后表达了吗？
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41楼2013-07-04 08:59:34
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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40楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-04 08:56:52
我想尝试做WB，但是大量扩繁 做完蛋白纯化 跑PAGE的时候居然什么条带也没有。。是不是真的没有表达？好难过。。。...

你应该去做WB，如果再没有，那就是没有表达了。就要找原因了
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42楼2013-07-04 09:21:27
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aoda123

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
41楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-04 02:59:34
之前说你也是做的跨膜蛋白，最后表达了吗？...

表达出来了，但是表达量很低
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身体健康，工作顺利
43楼2013-07-04 09:46:47
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sherrysure

银虫 (小有名气)
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43楼: Originally posted by aoda123 at 2013-07-04 09:46:47
表达出来了，但是表达量很低...

是通过优化诱导表达的条件就发现表达了的吗？还是WB验证的呢？在WB之前是不是要大量富集纯化出来呢？谢谢！
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44楼2013-07-04 10:51:36
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sherrysure

银虫 (小有名气)
引用回帖:
42楼: Originally posted by dshlove at 2013-07-04 09:21:27
你应该去做WB，如果再没有，那就是没有表达了。就要找原因了...

在WB之前不是一般要通过富集纯化的吗？还是说你的意思是直接用诱导4h的菌液PAGE后直接做WB呢？
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45楼2013-07-04 10:52:42
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aoda123

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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45楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-04 04:52:42
在WB之前不是一般要通过富集纯化的吗？还是说你的意思是直接用诱导4h的菌液PAGE后直接做WB呢？...

我直接做的WB，没有纯化。本身表达很低，纯化后没有多少
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身体健康，工作顺利
46楼2013-07-04 11:20:13
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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45楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-04 10:52:42
在WB之前不是一般要通过富集纯化的吗？还是说你的意思是直接用诱导4h的菌液PAGE后直接做WB呢？...

如果是你这种情况，我的建议是，第一步富集一下就去做WB。
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47楼2013-07-04 12:41:45
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
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40楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-04 08:56:52
我想尝试做WB，但是大量扩繁 做完蛋白纯化 跑PAGE的时候居然什么条带也没有。。是不是真的没有表达？好难过。。。...

我做western的没有纯化，直接做的
你可以尝试一下
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48楼2013-07-05 02:01:36
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sherrysure

银虫 (小有名气)
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47楼: Originally posted by dshlove at 2013-07-04 12:41:45
如果是你这种情况，我的建议是，第一步富集一下就去做WB。...

是不是就是这样：比如说接种到300ml的培养基，摇3h，然后加IPTG诱导4h，直接取样page，之后WB。如果有表达的话就可以看到？？
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49楼2013-07-05 18:06:58
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
49楼: Originally posted by sherrysure at 2013-07-05 18:06:58
是不是就是这样：比如说接种到300ml的培养基，摇3h，然后加IPTG诱导4h，直接取样page，之后WB。如果有表达的话就可以看到？？...

这样是可以的，但是如果你的表达量很少的话，就不好说了，可能会看不清。
如果你表达量很少（在page上看不到明显条带），如果胞内表达的话，收细胞，破碎之后富集一下，再做WB。
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50楼2013-07-06 19:59:37
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